辅酶Q10高产菌株的诱变选育-论文.pdf

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1、※生物工程艮晶科学2012，Vo1．33，No．11121辅酶Q10高产菌株的诱变选育曹燕妮，岳田利，袁亚红，高振鹏(西北农林科技大学食品科学与工程学院，陕西杨凌712100)摘要：以豌豆根瘤菌(Rhizobiumleguminosarum1．1723)~J出发菌株，利用紫外-LiC1和超声波进行诱变，以期获得高产辅酶Q10菌株。结果表明：lg／LLiC1诱变能显著提高菌株的正突变率，超声波诱变会引起细胞壁结构与构成发生改变。通过罗红霉素初筛和摇床复筛，获得辅酶Q10突变株C40—05，胞内辅酶Q10产量为1．198mg／g干菌

2、，比出发菌株(0．389mg／g)提高了208％。菌株经5次传代培养，胞内辅酶Q10产量下降了2．67％，突变株遗传形状稳定，可作为辅酶Q10生产菌株。关键词：豌豆根瘤菌；辅酶Q10；紫外一LiC1；超声波；诱变InducedMutationBreedingandScreeningofaCoenzymeQ10一ProducingStrainCAOYan—ni，YUETian—li，YUANYa—hong，GAOZhen—peng(CollegeofFoodScienceandEngineering，NorthwestA&FUni

3、versity，Yangling712100，China)Abstract：Rhizobiumleguminosarum1．1723wasmutagenizedbymeansofLiC1treatmentfollowedbyUVirradiationorultrasonictreatmentalonetoyieldcoenzymeQ10一producingstrains．Theresultsshowedthat1g／LLiC1couldobviouslyincreasethepositivemutationrateandthat

4、ultrasonictreatmentcouldchangecellwallstructureofRhizobiumleguminosarum．AmutantC40-05withhighproductivityofcoenzymeQ10wasobtainedthroughpreliminaryscreeningwithroxithromycinandsecondaryscreeningbymeansofshakeflaskcultivation．ItscoenzymeQ10yieldwasupto1．198mgg，whichre

5、vealeda208％increasecomparedwiththeoriginalstain．Only2．67％reductionincoenzymeQIOyieldofthemutantwasobservedafterthefifthpassage．Therefore，theobtainedmutantisastablestrainthatdeservestobestudiedfurther．Keywords：Rhizobiumleguminosarum：coenzymeQlO：uv—LiCl~ultrasonic：muta

6、genesis中图分类号：TS201．3文献标识码：A文章编号：1002。6630(2012)11-0121．05辅酶Q10(coenzymeQlO)又称癸烯醌、泛醌，是纯化、产品活性好[s】，因而成为最有发展前景的生产方脂溶性醌类化合物，广泛存在于动物、植物和微生法。目前，国内制约微生物发酵法生产辅酶Q10的关物细胞等生物体内，是电子传递的重要组成部分，键在于缺乏优良的辅酶Q10生产菌株。具有抗氧化、增强免疫力和清除自由基的作用⋯。作近年来，紫外与氯化锂(LiC1)复合诱变被应用为一种重要的生化药剂，辅酶Q10在临床医学中有于

7、刺糖菌素[91、1，3一丙二醇【101、L．组氨酸⋯】等高产广泛的应用，对稳定性心绞痛、肌肉疾病、帕金森菌株的选育中，多数都以LiC1作为筛选平板与紫外症等疾病有很好的疗效[2-4]。研究表明，辅酶Q10的进行复合诱变。超声波诱变在乳链菌肽[121、(+)．乳基本保健用量为每日20～3Omg，长期高剂量服用辅酸【1]】、透明质酸【¨】等的高产菌株选育中也有较好的酶Q10可显著改善人体的身体健康状况[51，对一些疾突破。本实验选择豌豆根瘤菌为出发菌株，该菌株病有缓解和治疗作用，因此辅酶Q10又被称作营养生物量高、发酵周期短，适合短

8、时间内进行大量的补增剂【61。突变株筛选，再对菌株进行紫外一LiC1复合诱变和超辅酶Q10生产方法有动植物组织提取法、植物细胞声波诱变处理，结合罗红霉素抗性筛选，以期获得培养法L7J、化学合成法和微生物发酵法，其中微生物发辅酶Q10的高产突变株，旨为辅酶Q10的