s-腺苷甲硫氨酸高产菌株的筛选、诱变选育及其培养条件的优化

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1、四川师范大学硕士学位论文S-腺苷甲硫氨酸高产菌株的筛选、诱变选育及其培养条件的优化姓名：叶盛申请学位级别：硕士专业：生物化学与分子生物学指导教师：李维20070601四Ⅲ师范大学硕士毕业论文S．腺苷甲硫氨酸高产菌株的筛选、诱变选育及其培养条件优化研究生物化学与分子生物学专业研究生叶盛指导教师李维摘要s一腺苷甲硫氨酸(S-Adenosylmethionine，简称为SAM)广泛存在于各种生物体内，是人体内重要的生理活性物质，参与转甲基作用、多胺合成、转硫基作用等反应。在临床上，对于治疗肝病、抑郁症、关节炎等都具有一定的疗效，因此具有广阔的应

2、用前景。但由于价格昂贵，目前还未能得到广泛的应用。为获得SAM高产菌株，本论文展开了以下几方面的工作。首先，从自然界中采集到69个样品，从中分离得到572株酵母菌菌株。通过对该572株进行纸层析法初筛和}IPLc法复筛，筛选获得1株SAM产量相对较高的菌株，命名为$42-12，其胞内SAM含量为35．7mg／g。对分离到的菌株$42-12进行了多轮诱变选育。通过对菌株$42—12进行亚硝基胍(NTG)诱变、乙硫氨酸筛选，获得抗性菌株98株，其中突变株YA-89的SAM胞内含量为66．8mg／g，较菌株S42-12提高了1．87倍。突变菌株

3、YA一89经grG诱变和低浓度(10肛g／mL)制霉菌素筛选，获得制霉菌素抗性菌株35株，其中突变株YN-34的SAM胞内含量为71．6mg／g。突变株YN-34再经紫外(Uv)诱变和高浓度(50肛g／mL)制霉菌素抗性筛选，分离到抗性菌株4l株，并从中获得SAM高产突变株YQ一5，其SAM胞内含量为112．1Eg／g，较出发菌株$42-12提高了214．09％。突变菌株YQ．5产SAM的最佳培养基成分为：0．1％l(}I：PO,，0．1％Kvt-IPO,·3H20。0．03％MgS04．7H2()，0．01％CaCl2，0．01％FeS

4、04-7HzO，0．01％CoCl2，0．01％CuSO,·5H20，0．03％H

5、B0，，296酵母粉，8％蔗糖，1．5％胰蛋白胨，0．75％L-蛋氨HI四川师范大学硕士毕业论文酸。突变菌株在优化条件下发酵48小时，胞内SAM产量可达1740．0mg几，菌体生物量为14．6g／U。关键词：s一腺苷甲硫氨酸酵母菌分离诱交培养基优化四JI{拜巷大学硕士毕业论文IsolationofHighS—adenosylmethionineProducingStrainbycomplexMutationandOptimizationofCultureC

6、onditionsMajorinBiochemistryandmolecuIarbiologyPostgraduate：YeShcngTutor：LiWeiAbstractS—adenosylⅢethionine(SA哪isanimportantmetabolite，andasamethylgroupdonor，participatesinmanyreactions．Itisutilizedinthreekindsofkeymetabolicpathwaysincludingtransmethylation，polyaminesynthe

7、sisandtranssulfuration．AlthoughSAMhasbeenavailableasaprescriptionmedicatioqtoimprovemanydiseasessuchasdepression，osteoarthritis，fibromyalgia，andliverdisordersabouttWOdecadesago，itisexpensiveandoutofreachformostpeopleatthistime．Thereasonisthatthereisnoamoreefficientwaytopr

8、oduceit．alsoindustrial—scaleproductionofSAMisverylimited．ToobtainSAM．enrichedstrains．followingworksweredone．Inthefirststep，572strainswereisolatedfrom69differentsampleswithisolationmediumAyeaststrainnamed$42—12，theSAMcontentof#蠹fc!，was35．7mgpergrambiomass，wasisolatedbypape

9、rchromatographyandHPLc．Secondly．Strain$42—12wasmutatedbyN—methy-N-nitro-N’一nitrosoguanidine(NTG)