PUFAs高产菌株的选育及其培养基优化研究

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1、贵州大学硕士学位论文PUFAs高产菌株的选育及其培养基优化研究姓名：朱国胜申请学位级别：硕士专业：微生物学指导教师：刘作易;梁宗琦20030601中文摘要多不饱和脂肪酸具有多方面的药J_}j价值利营养价值。目前主要来源下动植物油，但动植物汕脂米源有限。近20年米的研究表明许多爽凶可以产生多不饱和I脂肪酸。真菌具有生长周期短，培养简单，产品质量稳定、不受季节，时间，气候，产地的限制，易规模化、产业化生产等优点。本研究选择了两株产脂真菌拟青霉3#B和被孢霉SM96，对他们进行了紫外线复合氯化锂诱变选育，选出了一株高产皿油酸的菌株B3a10

2、，该菌株摇瓶发酵生物量达lO．0759／L，脂含量达60％，油酸1876m扎，亚油酸1854m扎，Y．亚麻酸69mg『L，DHA32m啦，其中亚油酸比出发菌株3把(958m鲫城高了1．935倍。sM96诱变筛选出一株高产Y．亚麻酸的菌株TMll，其生物最达9．025∥L，总脂2．0989儿，油酸521mg／L．亚油酸145mg，L，Y-亚麻酸74mg，L。其中Y一亚麻酸的禽量比出发菌株Q5mg∞提高了近3倍。采用不同糖浓度和温度两个因子共同驯化遮两种真菌。本研究通过驯化找到了驯化两种真菌最优温度与糖浓度的组合驯化方式。3粕最优的驯化方

3、式为：20℃12％糖、24℃12％糖或28℃4％糖。sM96最优的驯化方式为：12％糖与28℃或12％糖与20℃。本驯化方式中，也先出了几株驯化结果较优的菌群：B330、B715、M330、M920。本研究还选择SM96诱变株TMll。对影响其多不饱和脂肪酸产生的因子Mg”，VB6，营葬盐，磷源。碳源，氦源酵母膏进行了正交试验。选出了最佳的培养基配方(A283c3D5ElF4)：Mgs04·7H201．og，vB6150mg，L，酵母膏6∥L，葡萄糖1009几，营养盐溶液lml几，K2HP042玑。利用此培养摇瓶发酵TMlI的生物置达

4、18．0213g，L，总脂达10．8128牡，GLA量达668m乩。关键词：油酸，亚油酸，卜亚麻酸，二十二碳六烯酸，驯化，诱变，发酵。被孢霉，拟青霉前言1．多不饱和脂肪酸的作用多不饱和脂肪酸(polyunsaturated觚yacjds，PuFAs)指的是含有两个缄两个以上不饱和双键的脂肪酸。根据从脂肪酸碳链甲基端算起，第一个双键出现的位置不同分为三大类：∞．3类，第一双键出现在第三碳原子处，主要包括*亚麻酸(洳lin01enicacidIALA)、二十碳五烯酸(eicosapent∞noicacid，EPA)、二十二碳五烯酸(doc

5、osapent∞no{cac．d’DPA)和二十二碳六烯酸(docosallexaenoicacid，DHA)：∞．6类，第一个双键出现在第六碳原子处，主要包括亚油酸(1inoleicacjd，LA)、共轭亚油酸(C0n；ugatedlinoleicacid，cLA)、丫-亚麻酸(garnma_lin01enicacid，GLA)、花生四烯酸(arachidonicacid，AA)平¨烈高Y-弧麻酸(D．homo-Y—linolenicacid，DHGLA)；∞。9类，第一双键出现在第九碳原子上，主要包括油酸(01eicacid)和二

6、十碳三烯酸(meadacid)。EPA和DHA影响AA的环氧化酶代谢(cyclooxygenase，co)和脂氧酶代谢(1ipooxygen躺e，LO)。∞．3PuFAs中的EPA被称为“血管清道失”，DHA被称为“脑黄金”，ALA被称为“植物脑黄金”，∞-3PuFAs具有抗血栓、抗炎症、抗过敏、抗肿瘤、抗心率失常、降低血压、防止心肌缺血、调节血脂、抑制动脉粥样硬化等作用，近来发现DRA在防治心脑血管疾病上比EPA强10～20倍14】pw口⋯。DHA有助于神经系统的发育，提高学习记忆能力，提高视网膜的功能。DHA不足常会导致老花、近视

7、、假性近视、老年痴呆症等视觉和神经系统的疾病p】。英国营养基金会建议成人每天摄入EPA和DHA1～1．5克p”。OLA对糖尿病、心脏病、高血压、高血脂、中风、过敏性湿疹、月经前综合症患者等都有明显的疗效、可促进被酒精损伤肝功能的恢复，对免疫系统疾病具有调节作用。从及其代谢物亦能促进或放大其它第二信使系统，如cAMP和cGMP：AA及其代谢物参与造血和免疫调节，影响心血管系统及肝、胆器官，参与调节神经分泌组织分必多种激素和神经肽，促进细胞分裂增生。AA及其代谢物还和多种疾病有关．如：脑缺血、皮肤病、糖尿病、肾病、呼吸道疾病、哮喘病等。近

8、年来研究发现它是生长，生殖和保护皮肤正常所必需的。LA是重要的化工及日化工业原料，主要用于制药、涂料、合成树脂及表面活性剂等行业，弧油酸与油醇结合形成的亚油酸油醇酯可用作高级润滑剂和高级润肤油的原料，LA可以通过肝的生物