产耐热蛋白酶乳酸菌的筛选、产酶条件及其酶学性质的研究

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1、※生物工程食品科学2008,Vol.29,No.10375产耐热蛋白酶乳酸菌的筛选、产酶条件及其酶学性质的研究方芳，冀林立，张彦斌，张和平，孟和毕力格*(内蒙古农业大学乳品生物技术与工程教育部重点实验室，内蒙古呼和浩特010018)摘要：从内蒙古部分传统发酵乳样品以及酸菜汤中分离到105株乳酸菌，用检测蛋白酶产生水解圈和福林酚蛋白酶活性测定相结合的方法，从中筛选出一株耐热蛋白酶产生菌株WH29-3-1，该菌株经初步鉴定为Enterococcusfaecium。同时，对其产酶条件及酶学性质进行研究。结果表明，菌株WH29-3-1是在以葡萄糖为碳源、蛋白胨+牛肉膏+酵母粉为氮源、碳氮比为

2、0.8、pH7.0的最适产酶培养基中45℃、接种量为4%的条件下发酵培养30h，具有最大产酶量13.13U/ml，且K2HPO4、MgSO4有促进蛋白酶产生的作用。由菌株WH29-3-1产生的耐热蛋白酶的最适作用pH值为7，最适作用温度为50℃。结果表明，该菌是一株具有进一步改造利用价值的产蛋白酶菌株。关键词：乳酸菌；耐热蛋白酶；酶活力ScreeningofThermoduricProteinase-ProducingLacticAcidBacteria，ConditionsofEnzymeProductionandPropertiesofProducedThermoduricPro

3、teinaseFANGFang，JILin-li，ZHANGYan-bin，ZHANGHe-ping，MENGHEBILIGE*(KeyLaboratoryofDairyBiotechnologyandEngineering,MinistryofEducation,InnerMongoliaAgriculturalUniversity,Huhhot010018,China)Abstracts：105strainsoflacticacidbacteriawereisolatedandidentifiedfromdairyproductsandsourcabbagesoupinBayan

4、haotefoInnerMongolia,andastrainproducingthermoduricproteinase,namedEnterococcusfaecium,wasscreenedfromthelacticacidbacteriabydetectinghydrolysiscircleofproteinaseanditsactivity.Theexperimentalresultsrevealedthattheoptimalconditionsforproducingthermoduricproteinaseareasfollows:glucoseascarbonand

5、peptoneplusbeefextractplusyeastpowderasnitrogensources,carbon-nitrogenratio0.8;inoculumsize4%,pH7.0,fermentationtemperature45℃andfermentationtime30h.Undertheseconditions,theyieldofthermoduricproteinaseis13.13U/ml.ItwasfoundthatK2HPO4andMgSO4canpromotetheproductionofthermoduricproteinase.Theacti

6、vityofthisenzymeisthehighestatpH7and50℃.Basedontheaboveresults,thestrainispromisinginproducingthermophilicproteinase.Keywords：lacticacidbacteria；thermoduricproteinase；proteinaseactivity中图分类号：TS201.3文献标识码：A文章编号：1002-6630(2008)10-0375-05蛋白酶是一种重要的工业用酶，其生产几乎占酶制限制[4]。耐热蛋白酶是一类在高温下仍能保持一定活性剂市场的65%以上[1]

7、，广泛运用于食品、药物、皮革的蛋白酶的总称。它来源于高温微生物(即生长温度在制备、蛋白水解和纺织工业等[2-3]。常温蛋白酶作为生45～55℃范围的微生物[8])、嗜热微生物(即在55℃以上能物大分子的活性物质，因其在保存和应用的过程中常常生长的微生物[9])。耐热蛋白酶由于具有显著的热稳定性出现不稳定的现象，特别是在高温、强酸、强碱和高及其对有机溶剂、去垢剂和变性剂有较强的抗性而在蛋渗等极端的条件下易失活，在工业应用上受到了较大的白酶应用的各个领域显示出