高温蛋白酶产生菌的筛选及其产酶条件和酶学性质分析

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1、生物技术通报·研究报告·BIOTECHNOLOGYBULLETIN2011年第3期高温蛋白酶产生菌的筛选及其产酶条件和酶学性质分析廉立慧高丽君王德才张显忠李艳玲(泰山医学院生物科学系，泰安271000)摘要:从徂徕山温泉附近土样中分离到9株产高温蛋白酶菌株，选取一株碱性蛋白酶高产菌株L7为出发菌株，进行显微形态、16SrRNA基因序列分析，将其初步鉴定为短芽孢杆菌(Brevibacillussp．)。研究该菌株发酵条件，确定产酶的最佳培养基组成为葡萄糖40g/L，蛋白胨20g/L，磷酸氢二钠1．4g/L，氯化钙0．6g/L，硫酸镁0．4g/L，通过培养基优化，酶活

2、达到103．08U/mL。最佳培养条件为250mL三角烧瓶中装液量50mL、pH8．0、培养温度为55℃、培养时间为24h。对该菌株酶学性质研究，L7菌株所产高温蛋白酶的最适温度为55℃，最适pH为10，并且具有良好的温度稳定性和pH稳定性，酶活性受PMSF强烈抑制。关键词:短芽孢杆菌高温蛋白酶发酵条件酶学性质ScreeningofThermostableProtease-producingBacteriumandAnalysisofFermentationConditionsandProteasePropertiesLianLihuiGaoLijunWangDe

3、caiZhangXianzhongLiYanling(DepartmentofBiologicalSciences，TaishanMedicalCollege，Taian271000)Abstract:NinethermophilicbacterialstrainswiththermophilicproteaseactivitywerecollectedfromthesoilaroundahotspringinMountainCulai．Thestrainwhichshowedhighproteaseactivitywasselectedforproteaseas

4、sayandnamedasL7．Basedonmorpho-logicalcharacteristicsand16SrRNAgenesequenceanalysis，strainL7wasidentifiedasBrevibacillussp．．Theoptimalmediumcom-ponentswereglucose40g/L，peptone20g/L，Na2HPO41．4g/L，CaCl20．6g/L，MgCl20．4g/L．Theproteaseactivitycanachieve103．08U/mLthroughthemediumoptimization

5、．Theoptimalcultureconditionswere50mLmediumin250mLErlenmeyerflask，ini-tialpH8．0，at55℃for24h．Enzymaticpropertiesshowedthattheenzymeoptimaltemperatureis55℃，optimumpH10.0．Theen-zymeexhibitedhighthermalstabilityandstableatawiderangeofpH，anditsactivityisintensivelyconstrainedbyPMSF．Keywords

6、:Brevibacillussp．ThermophilicproteaseFermentationconditionEnzymaticproperties蛋白酶作为一类广泛用于工业生产和研究用的产高温蛋白酶的高温短芽孢杆菌，命名为Brevi-酶，在洗涤剂、制革脱毛、生丝脱胶、有机合成、酒类bacillussp．strainL7，对其产酶条件及一些酶性质澄清、明胶及蛋白胨生产、肉质嫩化和医药等方面应进行研究。［1］用广泛，占酶制剂市场65%的份额。高温蛋白酶1材料与方法具有耐热、耐变性剂和耐有机溶剂等优点，在蛋白酶1．1材料［2］应用的各个领域显示出极大的潜力。20

7、世纪50、采集土壤来自徂徕山温泉周围。在温泉周围60年代，国外学者已开始了高温菌产高温蛋白酶的［7］［3，4］16个方位采集土样，－20℃冷冻保存。研究，至今有许多这方面的报道。国内对高温菌的研究起步较晚，所筛选到的菌株产高温蛋白酶1．2主要培养基［5，6］分离培养基(1L):酵母膏1g，蛋白胨2g，硫的能力也不高。本研究从温泉样品中筛选得到一株活性较高酸铵3g，硫酸钾0.5g，氯化钾0.1g，甘氨酸0.7收稿日期:2010-08-24基金项目:泰山医学院青年基金项目作者简介:廉立慧，女，硕士，讲师，研究方向:微生物学;E-mail:lianlihui@yahoo

8、．com．