产蛋白酶乳酸菌的筛选【毕业设计】

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1、本科毕业设计（20__届）产蛋白酶乳酸菌的筛选目　录1引言12材料与方法12.1材料12.2试剂12.2培养基22.3主要仪器与设备22.4其他器材32.5方法32.5.1乳杆菌初步筛选32.5.2筛选产蛋白酶的乳酸菌42.5.3蛋白酶活力测定42.5.4计算63.结果与讨论63.1乳酸菌的筛选63.2产蛋白酶乳酸菌的初筛73.3福林法测定蛋白酶活力83.3.1标准曲线绘制83.3.2乳酸菌菌株蛋白酶活力测定94结论95展望9致谢10参考文献11摘要：为获得具有高产蛋白酶能力的乳酸菌种，本实验利用MRS培养基、过氧化氢试验和革兰氏染色试验从

2、牛奶、泡菜、鲈鱼肠中分离筛选出乳酸菌，再进一步利用酪蛋白培养基与福林法试验筛选出高具有高产蛋白酶能力的乳酸菌菌种。实验从牛奶、泡菜、鲈鱼肠中共分离筛选出17株乳酸菌，经进一步实验筛选出其中具有最强产蛋白酶能力的菌株SA1。它在酪蛋白培养基上产生的溶蛋白圈直径与酶活力分别为21mm，61.57U/mL。关键词：乳酸菌;蛋白酶;分离;筛选Abstract:Inordertoobtainprotease-producinglactobacillusspecies,,MRSmedium,hydrogenperoxidetestandGramstai

3、ntestwereusedtoisolatedlactobacillusformmilk、pickles、perchguts,thenMediumcaseinandtheFolinmethodtestwasusedtoscreeneprotease-producinggoodlactobacillus.17strainslactobacilluswereisolatedfrommilk、pickles、perchguts.Thenfurtherexperimentsisolatedthestrongestproteaseproduction

4、abilitystrainsSA1,whichcirclediameterofsolubleproteinonCaseinmediumandenzymeactivitywere21mm,61.57U/mL.Keywords:Lactobacilli;Protease;Isolated1引言乳酸菌（lacticacidbacteria,LAB)指发酵糖类主要产物为乳酸的一类无芽孢、革兰氏染色阳性细菌的总称[1]。目前至少可分为18个属，共有200多种[2]。许多乳酸菌是益生菌，是人体内必不可少的且具有重要生理功能的菌群，其广泛存在于人体的肠道

5、中，对人和动物的健康是有益的[3]。乳酸菌的益生作用主要体现在以下六方面[4]：1、排除致病菌、维持宿主肠道菌相平衡。2、营养价值。乳酸菌有利于维他命K、维他命B的吸收，同时也可促进钙及其它营养的消化吸收预防骨质疏松症。3、改善乳糖不耐症。乳酸菌所含的酶系统可弥补乳糖不耐症患者宿主产生乳糖分解酶不足的缺陷，利用乳酸菌产生的乳糖分解酶活性，将肠内乳糖代谢分解。4、减少血液胆固醇堆积。5、抑制癌症。食用乳酸菌或肠内有足够的乳酸菌存在时，可减低人类粪便中的某些菌体产生的酥活性如nitroreductase、azoreductase及β-glucu

6、ronidase等致癌酶的活性。6、刺激免疫反应，增加宿主抵抗能力。乳酸菌细胞壁含有某些抗原成分可诱发活化、增加巨噬细胞及淋巴细胞而强化免疫球蛋白A(IgA)的浓度，并产生r-干扰素以刺激宿主免疫系统抑制肿瘤或者使寄主产生免疫抗体以抑制病菌吸附黏膜表面。目前关于乳酸菌的研究报道虽然已经很多[5-7]，但关于乳酸菌代谢产物的研究报道却很少，其中关于产蛋白酶乳酸菌的研究报道只有寥寥几篇。现今，由于乳酸菌具有营养作用、食疗功效、医疗保健功能和安全性它在现今社会已得到了广泛的研究和开发[8]。乳酸菌蛋白质水解能力是影响乳酸菌益生作用的重要因素和开发

7、含有乳酸菌的乳制品时，筛选性质优良，稳定性强的工业生产菌株的主要指标[9]。因此对它的研究具有十分的必要性和迫切性。乳酸菌蛋白酶的主要作用[10]：第一，分解蛋白质分子产生多肽、氨基酸，利于宿主的消化吸收；第二，利于分解牛乳使生成的乳酸，增加胃内酸度从而提高胃蛋白酶的活性，利于胃肠道内乳酸菌等有益菌的生长；第三，借助蛋白酶敏感机制，促进损伤的肠黏膜上皮修复，防止致病菌在肠上皮细胞间移位。因此，乳酸菌蛋白质水解能力是影响乳酸菌开发利用的重要指标。通过对产蛋白酶乳酸菌的筛选可以在乳酸菌开发利用过程中更利于筛选出品质优良、性质稳定的乳酸菌菌种；产

8、蛋白酶乳酸菌的筛选也可以为蛋白酶的生产提供依据[11]；产蛋白酶乳酸菌的筛选还可以为饲料的生产提供依据[12]。总之，产蛋白酶乳酸菌的筛选可以为我国乳酸菌相关行业提供有力的支持，