产纤维素酶真菌的筛选及其产酶条件的研究

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1、维普资讯http://www.cqvip.com2008No．3·14·SerialNo．180ChinaBrewingResearchReport产纤维素酶真菌的筛选及其产酶条件的研究陈合，舒国伟，杨博，黄艳(陕西科技大学生命科学与工程学院，陕西西安710021)摘要：从腐朽的玉米秸秆上及土壤中筛选出了l株维素酶高产菌株HY一07，并以玉米芯和麸皮为主要原料，通过单因子试验和正交试验对该菌的产酶条件进行了研究。其最佳产酶条件为250mL~-角瓶装料量6g，玉米芯：麸皮为ll：14，固液比l：O．8，吐温．8O添加量为O．2％，K2HPO4q~

2、"量0．05％，MgSO4·7H20含量O．025％，(NI-D2SO含量l％，pH值自然，30％恒温培养7d，其酶活力达~tJ674．44U／g，比初始增加了50．8％。关键词：筛选；透明圈；纤维素酶：固体发酵中图分类号：Q814；Q93—331文献标识码：A文章编号：0254—5071(2008)03—0014—03Screeningofcellulase-producingfungiandresearchOilcellulase-producingconditionsCHENHe，SHUGuowei，YANGBo，HUANGYan(Col

3、legeofLifeScience&Engineering,ShaanxiUniversiO~ofScience&Technology,Xi'an710021．China)Abstract：StrainHY一07withhighercellulaseactivitywasscreenedfromrottencornstrawandsoil．TheconditionsofcellulaseproductionbystrainHY一07werestudiedbysinglefactortestandorthogonaltest．Theoptimal

4、conditionsforenzymeproducdonwereconfirmedasfollows：mediumweight6gin250mlflask，ratioofcomcobtobran11：14，ratioofsolidtoliquid1：O．8，Tween一8OO．2％，fNH,hS04I％，MgSO4’7H20O．025％，KH2PO4O．05％，naturalpnvalue，30％for7d．Theenzymecellulaseactivityofcouldreach674．44U／gundertheconditionsment

5、ionedabove，theen—zymeactivitywasincreasedby50．8％comparedwiththeinitialvalue．Keywords：screening；transparentzone；cellulase；solidstatefermentation纤维素是地球上最丰富的可再生资源，全球每年产生1．2方法的纤维素高达1000亿t(干重)m。但这些资源大部分被烧掉，1．2．1菌株筛选采用刚果红染色法旧利用率很低。如用纤维素酶将纤维素降解为可发酵性的向培养皿中加入适量lmg／mL刚果红溶液，染色1h，弃糖，再进一

6、步转化为乙醇、单细胞蛋白及气体燃料等物质，去染液；加入适量1mol／L的NaC1溶液，洗涤1h，若菌落对解决全球面临的能源危机、食品短缺及环境污染等问题产生纤维素酶，则在菌落的周围会出现清晰的透明圈，可具有重大的意义[2-3]，且纤维素酶在食品发酵工业，如制酒、依据透明圈与菌落直径比值的大小筛选产酶菌株。酱油酿造、饮料行业及食品加工(如大豆、茶叶加工)中应1．2．2酶液制备用广泛，但因纤维素酶活力不高而导致酶用量过大，从称取一定量的固体发酵曲，加入一定比例的2％NaCl而阻碍了其大规模的生产应用，因此，筛选酶活高的野生溶液，30℃、150r／m

7、in振荡浸提1．5h，用2层纱布挤滤，滤液菌株，对纤维类资源的利用具有重要意义。试验从腐朽的3500r／min离心20min，上清液即为酶液。玉米秸秆及土壤中筛选出了1株产纤维素酶能力强的菌株，1．23酶活测定[弼并以玉米芯和麸皮为主要原料，对其产酶条件进行了研究，以柠檬酸一硫酸氢二钠(0．2mol／L，pH4．4)缓冲液配制为玉米芯的废物利用及纤维素的开发奠定了试验基础。0．625％CMC-Na底物溶液。取0．5mL酶液与2．5mL底物1材料与方法溶液50℃水浴保温30min，测定反应后还原糖含量，同时1．1材料做空白对照。酶活定义为在上述条

8、件下，每小时产生1mol1．1．1采样来源葡萄糖的酶量为1个酶活力单位(u)。陕西咸阳腐朽的玉米秸秆及其下层土样。2结果与讨论1．1．2培养基2．1葡