一株高产蛋白酶菌株的筛选及其产酶条件(.doc

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1、一株高产蛋白酶菌株的筛选及其产酶条件*基金项目:广东高校特色调味品工程技术开发中心建设项目(GCZX-B1103),广东省教育部产学研结合项目(2012B091000040),广东轻工职业技术学院自然科学启动基金项目(KJ201307),广东轻工职业技术学院自然科学启动基金项目(KJ201203)。第一作者简介:林玩庄(1994.11-),女,研究方向为生物技术。林玩庄,林淑娜,陈汶聪,刘荣莲,黄可佳,黄丹敏,谢桂仁,陈宇豹,邓毛程,王瑶,李静广东轻工职业技术学院,广州,510300摘要:为了提高水产行业蛋白质资源的综合利用率

2、,从南海海域大型鱼类的肠道中筛选蛋白酶高产菌株。采用平板透明圈法和摇瓶发酵法进行筛选,获得一株蛋白酶高产菌株PE11。通过菌体形态观察、生理生化实验和16SrDNA鉴定,菌株PE11被鉴定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)。通过摇瓶发酵试验,优选出可溶性淀粉和牛肉膏分别为最佳的碳源和氮源,并确定菌株PE11产蛋白酶的最佳条件为:温度30°C、初始pH7.0、转速200rpm和时间36h。在最佳的产酶条件下,发酵液中的蛋白酶活力可达376U/mL。关键词:蛋白酶;高产;筛选;产酶条件Study

3、onscreeningandenzyme-producingconditionsofahighproteaseproducingstrainLINGWan-zhuang,LINGShu-Na,CHENWen-cong,LIURong-lian,HUANGKe-jia,HUANGDan-min,XIEGui-ren,CHENYu-bao,DENGMao-cheng,WANGYao,LIJing(GuangdongIndustryTechnicalCollege,Guangzhou510300)Abstract:Inorderto

4、improvethecomprehensiveutilizationrateofproteinresourcesfromaquaticindustry,strainshavingtheabilitytoproduceproteasewereisolatedandscreenedfromthegastrointestinaltractoflargefishofSouthChinaSea.Usingflattransparentcircleandshakeflaskfermentationtest,ahighproducingpr

5、oteasestrainPE11wasobtained.ThestrainPE11wasidentifiedasBacillusamyloliquefaciensthroughthesystematicinvestigationsofmorphology,physiologicalandbiochemicalcharacteristicsand16SrDNAsequencesanalysis.Bymeansofshakeflaskfermentationtests,theoptimalcarbonresourceandnitr

6、ogenresourceforstrainPE11weresolublestarchandbeefextract,respectively.Inaddition,thebestconditionsforprotease-producingweredeterminedastemperatureof30°C,initialpHof7.0androtationspeedof200rpm.Attheoptimalcondition,thehighestproteaseactivityoffermentationbrothreached

7、376U/mL.Keywords:protease;highproducing;screening;enzyme-producingcondition引言近年来,我国的水产养殖量和加工量一直居世界首位[1-2]。但是,在捕捞和加工过程中,低值水产品往往占总产量的30%~50%[3-4]。如果这些低值水产品得不到高值化利用,将造成大量蛋白质资源的浪费。随着人们对低值水产品综合利用的重视,蛋白酶及其高产菌种的应用日益增加。为了直接利用高产蛋白酶菌种对低值水产品进行开发高值化产品,本实验主要筛选蛋白酶高产菌种,以及初步研究所得菌种的

8、产酶条件。1材料与方法1.1筛选材料与试剂筛选材料:南海海域大型鱼类的肠道组织;酪氨酸:分析纯,市售;Folin试剂及其它试剂:分析纯,市售。1.2培养基富集培养基:葡萄糖40g/L,蛋白胨10g/L,酵母膏5g/L,Na2HPO42g/L,KH2PO41g/L,MgSO4·

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