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1、一株高产蛋白酶菌株的筛选及其产酶条件*基金项目：广东高校特色调味品工程技术开发中心建设项目（GCZX-B1103），广东省教育部产学研结合项目（2012B091000040），广东轻工职业技术学院自然科学启动基金项目（KJ201307），广东轻工职业技术学院自然科学启动基金项目（KJ201203）。第一作者简介：林玩庄（1994.11-），女，研究方向为生物技术。林玩庄，林淑娜，陈汶聪，刘荣莲，黄可佳，黄丹敏，谢桂仁，陈宇豹，邓毛程，王瑶，李静广东轻工职业技术学院，广州，510300摘要：为了提高水产行业蛋白质资源的综合利用率
2、，从南海海域大型鱼类的肠道中筛选蛋白酶高产菌株。采用平板透明圈法和摇瓶发酵法进行筛选，获得一株蛋白酶高产菌株PE11。通过菌体形态观察、生理生化实验和16SrDNA鉴定，菌株PE11被鉴定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)。通过摇瓶发酵试验，优选出可溶性淀粉和牛肉膏分别为最佳的碳源和氮源，并确定菌株PE11产蛋白酶的最佳条件为：温度30°C、初始pH7.0、转速200rpm和时间36h。在最佳的产酶条件下，发酵液中的蛋白酶活力可达376U/mL。关键词：蛋白酶；高产；筛选；产酶条件Study
3、onscreeningandenzyme-producingconditionsofahighproteaseproducingstrainLINGWan-zhuang,LINGShu-Na,CHENWen-cong,LIURong-lian,HUANGKe-jia,HUANGDan-min,XIEGui-ren,CHENYu-bao,DENGMao-cheng,WANGYao,LIJing(GuangdongIndustryTechnicalCollege,Guangzhou510300)Abstract：Inorderto
4、improvethecomprehensiveutilizationrateofproteinresourcesfromaquaticindustry,strainshavingtheabilitytoproduceproteasewereisolatedandscreenedfromthegastrointestinaltractoflargefishofSouthChinaSea.Usingflattransparentcircleandshakeflaskfermentationtest,ahighproducingpr
5、oteasestrainPE11wasobtained.ThestrainPE11wasidentifiedasBacillusamyloliquefaciensthroughthesystematicinvestigationsofmorphology,physiologicalandbiochemicalcharacteristicsand16SrDNAsequencesanalysis.Bymeansofshakeflaskfermentationtests,theoptimalcarbonresourceandnitr
6、ogenresourceforstrainPE11weresolublestarchandbeefextract,respectively.Inaddition,thebestconditionsforprotease-producingweredeterminedastemperatureof30°C,initialpHof7.0androtationspeedof200rpm.Attheoptimalcondition,thehighestproteaseactivityoffermentationbrothreached
7、376U/mL.Keywords：protease；highproducing；screening；enzyme-producingcondition引言近年来，我国的水产养殖量和加工量一直居世界首位[1-2]。但是，在捕捞和加工过程中，低值水产品往往占总产量的30%~50%[3-4]。如果这些低值水产品得不到高值化利用，将造成大量蛋白质资源的浪费。随着人们对低值水产品综合利用的重视，蛋白酶及其高产菌种的应用日益增加。为了直接利用高产蛋白酶菌种对低值水产品进行开发高值化产品，本实验主要筛选蛋白酶高产菌种，以及初步研究所得菌种的
8、产酶条件。1材料与方法1.1筛选材料与试剂筛选材料：南海海域大型鱼类的肠道组织；酪氨酸：分析纯，市售；Folin试剂及其它试剂：分析纯，市售。1.2培养基富集培养基：葡萄糖40g/L，蛋白胨10g/L，酵母膏5g/L，Na2HPO42g/L，KH2PO41g/L，MgSO4·
