中性蛋白酶高产菌株的筛选及产酶条件的优化

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1、生物工程粮油食品科技第22卷2014年第1期中性蛋白酶高产菌株的筛选及产酶条件的优化张晶(青岛农业大学食品科学与工程学院，山东青岛266109)摘要:从土壤中筛选出6株中性蛋白酶菌株，并对其中酶活力较强的1株枯草芽孢杆菌的发酵产酶条件进行了优化。最终得到最佳培养基配方为:玉米粉1%、硫酸铵0．6%、麸皮3%、Na2HPO4·12H2O0．4%，KH2PO40．03%，CaCl20．1%，pH6．0。最适培养条件为:发酵时间48h、发酵温度30℃，酶活力最高可达1475．6U/mL。关键词:中性蛋白酶;菌株;发酵条件中图分类号:Q93－335文献标识码:A

2、文章编号:1007－7561(2014)01－0100－04Thescreeningandoptimizationoffermentationconditionsofahigh－producingneutralproteasestrainZHANGJing(CollegeofFoodScience＆Engineering，QingdaoAgriculturalUniversity，QingdaoShandong266109)Abstract:6neutralproteasestrainswerescreenedfromthesoil，amongwhich

3、ahighestenzymeprodu-cingstrainbacillussubtiliswasstudiedonitsoptimumneutralproteaseproducingconditionsbyfermenta-tion．Theresultsshowedthattheoptimumculturemediumwaspreparedwithcornflourof1%，(NH4)2SO4of0．6%、branof3%Na2HPO4·12H2Oof0．4%，KH2PO4of0．03%，CaCl2of0．1%，pHof6．0．Andtheoptimu

4、mneutralproteaseproducingconditionswereasfollows:fermentationtime48h，fermentationtemperature30℃．Intheseconditions，thehighestenzymeactivityreached1475．6U/mL．Keywords:neutralprotease;strain;fermentationcondition蛋白酶是工业化酶制剂中应用最为广泛的酶制1．1．2培养基剂之一，中性蛋白酶作为一种生物催化剂被广泛地干酪素培养基:干酪素2．0%(用适量的Na

5、OH［1］应用于食品、制药、化妆品等行业。随着对蛋白溶液加热溶解)，琼脂1．5%，pH7．0。酶需求的日益增多，提高菌株产酶能力显得尤为重牛肉膏蛋白胨培养基:牛肉膏0．4%，蛋白胨要。但酶在体外催化反应易受到外部因子(如温0．6%，酵母浸出粉0．2%，NaCl0．5%，琼脂2．0%，度、pH、蛋白质变性因子等)的影响，所以酶学特性pH7．0。是其应用研究的理论基础［2］。发酵培养基I:麸皮4．0%，蛋白胨0．1%，本文主要从土壤中筛选出中性蛋白酶菌株，并Na2HPO4·12H2O0．4%，KH2PO40．03%，pH7．0。发酵培养基II:可溶性淀粉1．

6、0%，蛋白胨对其发酵条件进行优化，为中性蛋白酶菌株的进一步研究提供基础。0．5%，Na2HPO4·12H2O0．4%，KH2PO40．03%，CaCl20．1%，pH7．0。1材料与方法1．2实验仪器1．1实验材料721分光光度计，恒温水浴箱，超净工作台，灭1．1．1土壤样品菌锅，恒温震荡培养箱，恒温培养箱。采集青岛农业大学河边干燥土壤。1．3实验方法收稿日期:2013－04－161．3．1中性蛋白酶高产菌株的筛选、鉴定基金项目:省现代农业产业技术体系创新团队《食用菌创新团队—产后加工岗位科学家》(6213c4)(1)初筛:采样→稀释→涂布→挑选干酪素培

7、作者简介:张晶，1980年出生，女，吉林龙井人，讲师．100粮油食品科技第22卷2014年第1期生物工程养基中产生透明圈大的菌株。7．0，灭菌，接种，28℃恒温震荡培养36h，过滤得酶(2)复筛:菌株→划线分离→单菌落→分别进液，按酶活力测定方法测定不同玉米粉浓度发酵时行发酵→测酶活→筛选酶活最高的一株。产生的中性蛋白酶活力，从而选择最适玉米粉浓度。(3)菌种鉴定:菌落成乳白色或微黄色，边缘整(3)不同氮源的确定:以发酵培养基II为培养齐，表面有皱褶、隆起，菌落表面干燥，革兰氏染色反基，以氮源浓度为变量，其它组成为不变量，称取牛应为阳性(G+)，培养48

8、h可看到有芽孢出现，芽肉膏，酵母膏，蛋白胨，硫酸铵，尿素各0．5%于5个孢中生，