猪RAPD及其HFABP基因PCRRFLP的分子标记研究

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1、猪RAPD及其H-FABP基因PCR-RFLP的分子标记研究导师:杨公社教授硕士研究生:庞卫军(西北农林科技大学动物科技学院，陕西杨凌，712100)摘要本研究以杜洛克猪、大白猪、长白猪、内江猪、八眉猪、汉江黑猪、荣昌猪、汉中白猪计8个品种和野猪共265头个体基因组DNA为实验材料，通过RAPD分子标记分析8个猪种及野猪的亲缘关系;再利用PCR-RFLP技术分析猪心脏脂肪酸结合蛋白(H-FABP)基因的5’一上游区域和第二内含子区域的遗传多态性，为研究H-FABP不同基因型与肌内脂肪含量(IMF)的关系，进而为研究影响IMF沉积的主效基因

2、奠定基础。首先，用20个10碱基的随机引物对265份样品进行RAPD分析，结果3个引物的扩增产物表现为多态，6个引物的扩增产物表现为单态，扩增产物的电泳条带数在1一11条之间，平均4.1条。研究结果表明:I.八眉猪、汉江黑猪、内江猪两两间的亲缘关系分别为0.9565,0.9167和0.9375;长白、大白和杜洛克猪两两间的亲缘关系分别为0.9800,0.9574和0.9362其中长白与大白猪的亲缘关系最近:荣昌猪与汉江白猪间的亲缘关系为0.9020;而野猪与长白猪的亲缘关系最远为0.700002.聚类分析表明，3个引入品种中，长白和大白首

3、先聚为一类，再与杜洛克聚为一类;3个地方品种中，八眉猪和汉江黑猪先聚为一类，后与内江猪聚为一类:荣昌猪与汉江白猪单独聚为一类，再与地方品种聚为一类;而野猪则是先与中国猪种聚为一类，再与引入品种最后聚在一起。其次，利用PCR-RFLP技术检测了265头个体基因组DNAH-FABP基因5'-上游区和第二内含子内的遗传多态性，结果表明:1.5'-上游区的Hind-RFLP(1)不同猪种和野猪在Hinf1酶切位点均存在多态性，等位基因H在杜洛克猪、大白猪、长白猪、内江猪、八眉猪、汉江黑猪、荣昌猪、汉中白猪及野猪中的频率分别为0.7500,0.71

4、88,0.9167,0.3333,0.1250,0.6090,0.1167,0.8500和0.9075.其中，大白猪、汉中白猪和野猪，杜洛克、长白猪和荣昌猪，八眉猪和汉江黑猪间的Hinfi-RFLP的基因型分布相似(P>0.05)，不同类型间基因型分布差异极显著(P<0.01).(2)经梦检验，在Hinfl-RFLP位点上，汉江黑猪(P<0.05)和野猪(P<0.01)基因频率和基因型频率处于不平衡状态，其余的猪种基因频率和基因型频率都处于Hardy-Weinberg平衡(P<0.05).(3)在Hi叨-RFLP中，大白猪、八眉猪、汉江黑

5、猪、汉白猪和野猪表现为低度多态(PIC<0.25)，而其它猪种为中度多态(0.250.05),而类型间基因型分布差异极显著(P<0.01)。(2)8个猪种和野猪在Hae

6、III-RFLP中，基因频率和基因型频率均处于Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05).(3)在HaeIII-RFCP中，除4个地方品种和野猪表现为低度多态外(PIC<0.25)，其余均为中度多态性(0.250.05)，不同类型间基因频率和基因型

7、频率差异极显著(P<0.01)o(2)在MspI-RFLP，除杜洛克(P<0.01)外，其它猪种和野猪基因频率和基因型频率均处Hardy-Weinberg平衡状态。(3)在A帅I-RFLP中，长白、大白、4个地方品种和野猪表现低度多态性(PIC<0.25)，其余为中度多态性(0.25

8、f.YangGongsheMasterstudent:PangWeijun(theCollegeofAnimalScienceandVeterinaryMedicine,NorthwestSc