利用RAPD分子标记鉴定甜瓜、苦瓜种子纯度

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1、利用RAPD分子标记鉴定甜瓜、苦瓜种子纯度陈金体［巫峡王晓峰摘要：甜瓜、苦瓜是华南地区两种重要的水果蔬菜栽培品种，具冇较高的营养价值和经济价值。木实验以甜瓜、苦瓜种了为材料，通过改进种了DNA的CTAB提取方法和优化RAPD-PCR各因了(模板DNA浓度、引物浓度、dNTPs浓度、M尹浓度、退火温度、反应循坏数)，为实验室建立了较为稳定快速可靠的水果蔬菜种子纯度RAPD检测方法，为今后水果蔬菜RAPD指纹建立打下基础。关键词：甜瓜苦瓜RAPD分子标记种了纯度中国图书资料分类号文献标识码甜瓜(CucumismeloL.)是葫芦科｛Cucurbitaceae)甜瓜属中幼果无

2、刺的栽培种，一年生蔓性草木植物，染色体数2n二2x=24,果实香甜，分为网纹甜Jvar.reticulatusNaud.)、硬皮甜瓜(raz;cantalupensisNaud.)、冬甜瓜(var.inodorusNaud.)、观赏甜瓜(拠z:dudainNaud.)、柠檬瓜(var.chitoNaud.)、菜瓜(var.flexuosusNaud.)、香瓜(var.makuwaMakino)、和越瓜(回:conomonMakino)等8个变利苦瓜O伽】ordicacharantia)乂名凉瓜，一年牛.蔓性蔬菜，染色体数2n=2x=22,含糖首量高，按果实形状和表面特征

3、分为长圆锥形和短圆锥形两类。前者如广东滑身苦瓜、长身苦瓜和长江流域的口苦瓜，后者如广东人顶苦瓜，均是优良的栽培品种。种了纯度(geneticpurityofseeds)检测是指鉴定提供检样品屮木品种的种了数占•提供检样品总数的百分比。鉴定-•批种子所属品种、利或属与标签上的标明是否相同，是否名副其实称为品种真实性(genuinenessofvariety)鉴定。低纯度、真实性差的种子将给农业生产带来极大的损失。为了防止假种子事件发生，保护广大农民的利益，提高和控制我国种子公司的种子质量，建立简便、快速、准确、经济的种子纯度检测方法已势在必行。1990年来，RAPD(Ra

4、ndomAmplifiedPolymorphicDNA)随机扩增多态性DNA标记，已被证明是植物系统学、分类与鉴定研究的一个有川而简便的工具九役它是利用人工合成的随机寡聚核昔酸片断(9〜10bp)作为引物,用未知序列的基因组DNA为模板,通过PCR扩增后,得到具有多态性的DNA1一作者简介：陈金体(1983-12),女，华南农业大学生命科学学院02级生物技术专业，本科在读。片断。RAPD标记数量多，可以覆盖基因组中所冇位点，RAPD标记是显性的，不能区别生物个体基因型是纯合型述是杂合型的。该方法的优点主要是快速简便，无放射性污染，成本较低，分辨率高，灵皱度强，但由于其涉

5、及到多种微量成分参加反应，会出现重复性差等一些问题⑵。我们对PCR-RAPD中各关键因子进行了研究，根据自身实际，建立了一种比较简便快速，稳定准确的蔬菜种子纯度和品种真实性的检测方法。1.实验材料与方法1.1实验材料本文所试11个甜瓜品种、12个苦瓜品种,皆购自种子市场,详细信息如表1、表2：表111个甜瓜品种信息Tab.1Profilesfor11CucumismeloL.TypesintheResearch品种品种特性果实近圆形，成熟时果皮成黄白色；果肉白绿色、肉厚、质细而脆果味醇香，汁多运蜜一号适口；长势健壮，综合抗性好。一代交配，耐湿、耐热，适应性强，抗蔓割病。

6、果空丰满整齐，果皮光滑，白绿微新解甜瓜带黄色，肉色淡白绿，肉质松脆。一代交配梨甜瓜（美浓瓜），结果力强。果实丰正微扁球型，成熟时皮银辉色银口，不易裂果，肉色淡口绿，肉质松爽细嫩，香甜可口。一代交配，早生强健，耐湿、耐热，结果力强，果皮银白色稍带黄色，肉质松脆可新玉甜瓜口，果梗不易脱落，不易裂果，抗蔓割病及病毒病。原种，早熟品种，果实圆形，大而周正，果皮白色，质脆爽口，味香甜，抗逆性强，白沙蜜耐贮运。从白沙蜜屮历经三年套袋提纯的白瓜。高抗病毒、霜霉、枯萎，早熟，果型人而均白雪一号7匀，雪白透亮，香甜可口。白雪一号与国外材料杂交定向选育，高抗病毒、霜霉、白粉、枯萎，果圆型，

7、籽、赛雪皐后肉均口色，皮雪口透亮，果实清脆爽口，味香甜，耐贮运。果肉脆，果皮韧，耐贮运，植株长势旺，果皮白绿色，果面冇浅条纹，成熟后略变津甜一号黄。肉色浅绿，口感酥脆，风味好。一代交配，果实近圆球型，皮色白绿，果肉青翠，甜度高，肉质松脆，座果高，不一湾青玉易裂果霉烂，抗病力强。杂交一代，果实苹果型，果皮绿白色微透黄亮，果肉清脆香甜，易座瓜，抗病强，傲雪碧玉不易裂果、烂瓜。果实近似圆球型，皮色口绿，果肉青翠，甜度高肉质松脆，座果高，丰产，不易裂H本甜宝果霉烂，抗病力强。表213个苦瓜品种信息Tab.1Profilesfor13Momordi