玉米种子纯度ssr分子标记鉴定方法

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1、茄子杂交种种子纯度SSR分子标记鉴定技术规程编制说明沈阳市农业科学院2017年5月《茄子杂交种种子纯度SSR分子标记鉴定技术规程》标准编制说明一、工作简况,包括任务来源、协作单位、主要工作过程、主要起草人及其所做的工作;2016年6月沈阳市农业科学院向沈阳市质量技术监督局提交《项目建议书》,建议编制《茄子杂交种种子纯度SSR分子标记鉴定技术规程》标准。经审查及公示,项目被列入沈阳市地方标准制修订2016年度计划,沈阳市农业科学院为项目承担单位。项目立项后,项目承担单位成立了标准起草小组,落实了标准起草

2、经费,提供了必要的工作条件。标准起草小组的成员有:刘延斌、杨双、李俊、施骥、孙嘉兴、李雪、胡颖、马东梅、潘菊、闫玲、张健、李金凤、宋伟、朱秋云、赵晓旭、杜野。刘延斌,技术总负责;杨双、李俊、李金凤、马东梅、宋伟,标准样品收集;潘菊、施骥、张健、朱秋云、赵晓旭、杜野,负责技术资料检索;胡颖、孙嘉兴、李雪、闫玲,负责标准技术参数确定。标准起草小组在批准立项的一个月内制定了具体的标准起草计划。按照计划,2016年5月前完成资料收集、相关调研及试验验证;2016年6-8月编制征求意见稿;2016年9月开展书面

3、征求意见;10-12月完成意见整理、分析和处理;17年1-3月填写地方标准征求意见汇总表;2017年4月聘请省内农业专家对征求意见稿进行修改;5-6月完成意见整理、分析和处理,填写地方标准征求意见汇总表;7月送审;最后根据审查意见形成“标准报批稿”,报批。二、标准编制原则和确定地方标准主要内容(如技术指标、参数、公式、性能要求、试验方法、检验规则)的依据。地方标准修订项目,还应列出和原标准主要差异情况;茄子(SolanummelongenaL.),是一种茄科(Solanceae)茄属(Soalanum

4、L.)植物。茄果可供蔬食。根、茎、叶入药,为收敛剂,有利尿之效,叶也可以作麻醉剂。种子为消肿药,也用为刺激剂,但容易引起胃弱及便秘,果生食可解食菌中毒。原产亚洲热带,中国各省均有栽培。在全世界都有分布,以亚洲栽培最多,占世界总产量74%左右;欧洲次之,占14%左右。中国各地均有栽培,为夏季主要蔬菜之一,目前多数专家认为中国的茄子种质资源丰富,栽培历史悠久,品种繁多,是茄子的第二起源地或栽培驯化中心。茄子已成为我国许多省市县的主要经济支柱作物。但因种子纯度不高造成的减产从而影响经济效益的事件偶有发生,因

5、此种子纯度检测尤为重要。目前,我国鉴定茄子杂交种子纯度主要依靠田间种植检测法,此方法存在占地多,费时费工且受外界影响大。同工酶分析法受限于酶类的有限性,而且,所选酶的所有基因表达与酶谱存在不一致性,同时酶变异也未必都和形态变异有关,这就使有品种的杂交及亲本不易区别。另外,发育阶段或外界因素的影响对酶谱分析也会带来一些困难。随着分子生物学理论与技术的迅猛发展,DNA分子标记技术已有数十种,分子标记技术以其分析速度更快、成本更低、信息量更大等优势在动植物遗传学研究上前景广阔。SSR(SimpleSeque

6、nceRepeat,SSR)简单重复序技术,又称为微卫星DNA,是一类由1~6个核苷酸为重复组成的长达几十个核苷酸的串联重复序列。同一类的微卫星可分布于整个基因组的不同位置上。每个位置上重复单位的数目及重复单位序列的差异产生多态性,是一种较为理想的DNA标记技术。扩增产物经琼脂糖或聚丙烯酰胺电泳分离、溴化乙锭染色后,在紫外透视仪上检测多态性。扩增产物的多态性反映了基因组的多态性。SSR技术现已广泛的应用于生物的品种鉴定、系谱分析及进化关系的研究上。SSR技术其优点有:①SSR引物能直接从已发表的文献资

7、料、数据库或查找近缘种SSR引物来获得,也能够使用经典的分子生物学方法克隆,可节约大量的时间和精力;②在分子遗传学的研究中,相对来说,SSR分子标记容易扩增,且大多都有相应的软件支持系统,使得微卫星分析变得更加容易;③检测手段简单,规模小,可以进行非损伤取样且可在无放射性的实验室中进行;④试验的重复性高,便于进行数据比较;⑤不同等位位点的应用价值取决于各自的多态性程度,其多态性在研究上通常要比同工酶或异型酶更有价值;⑥一个SSR位点一般包括多个等位基因,具有高度多态性,适合用于分子遗传学研究,而这些多

8、态性则被认为是由于精确的DNA交换或DNA聚合酶的滑动错位所导致的重复单元数变化而造成的,尤其是一些特优种的产生,很可能是通过产生新的等位基因位点出现的;⑦呈孟德尔共显性遗传模式,能够区别纯合显性个体和杂合显性个体,这为遗传学研究提供了更多可供分析的信息。三、主要试验(或验证)的分析报告、相关技术和经济影响论证、预期的社会经济效益;1.DNA制备方法筛选采用植物DNA提取常见方法——树脂型基因组DNA提取试剂盒提取,主要按照说明书要求操作:取单株幼叶10

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