烟草黑胫病抗性基因 bsl ( t ) 的 rapd 标记

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1、第30卷第5期作物学报Vol.30,No.52004年5月516～518页ACTAAGRONOMICASINICApp.516～518May,2004研究烟草黑胫病抗性基因Bsl(t)的RAPD标记简报3X刘晓侠王荔文国松杨艳琼(云南农业大学农学与生物技术学院,云南昆明650201)ScreeningandStudyofRAPDMarkersLinkedtoTobaccoBlackShankResistanceGeneBs1(t)3LIUXiao2Xia,WANGLi,WENGuo2Song,Y

2、ANGYan2Qiong(CollegeofAgronomyandBiotechnology,YunnanAgriculturalUniversity,Kunming650201,Yunnan,China)[1]剂,对烟草花粉植株叶片的愈伤组织,进行抗病突变体细胞烟草黑胫病由VanBredadeHaan于1896年发现于印度尼西亚的爪哇,它是世界烟草生产中危害最严重的病害的筛选而获得)。2000年杂交,2001年种植F1代,2002年在[2]之一,同时也是我国烟草的主要病害。在我国除黑龙江省云南

3、农业大学农场种植双亲及F2代。尚无发现之外,其余各植烟省区均有发生,平均发病率为烟草黑胫病(Phytophthoraparasiticavar.nicotianae)0号强[3,4]5%～12%,严重田块高达75%,甚至造成绝收。据不完毒菌株由教育部云南农业大学植物病理重点实验室提供。2全统计,我国烟草黑胫病平均每年发病面积高达76373hm,1.2烟草黑胫病的抗性接种鉴定产量损失2.869万吨,经济损失超过1.23亿元,仅次于烟草采用烟草黑胫病菌(Phytophthoraparasiticav

4、ar.nicotianae)[5]病毒病。烟草黑胫病自发现一个多世纪以来,引起了世界0号强毒菌株进行人工茎基部针刺接种,在感病对照充分发各产烟国的普遍关注,相继投入大量的人力、物力和财力对病的情况下(26℃左右,5～7d),调查记录抗病分离情况,2～其分布、症状、病原、流行、预测及抗病育种、防治药剂和综合[3]3d后重复调查1次,病情鉴定按陈瑞泰的分级标准进行。治理等开展了大量的研究,但迄今为止,中国尚未培育出优1.3基因组DNA提取质高抗烟草品种。本研究经过辐射诱变获得了高抗烟草黑[8,9]D

5、NA微量提取用本课题组在传统CTAB法基础上改胫病的突变株系,通过感病品种红花大金元×突变抗病株进的方法。系,获得杂交F2分离群体,研究了其抗病遗传规律。利用1.4PCR反应RAPD标记和集团分离分析法(BSA)筛选,找到了与烟草抗随机引物为美国Operon公司产品,长度皆为10bp,随机黑胫病基因Bs1(t)连锁的RAPD标记OPB023000和选用其中的400个进行扩增筛选,PCR反应体积为20μL,其OPM112500,其遗传距离分别为20.5cM和29.9cM,为该基因中含有10～30n

6、g模板DNA(两个亲本和F2代),5mmolPL的进一步研究、利用及烟草抗病品种的选育积累了基础储MgCl2,0.2mmolPLdNTPs,0.2pmolPμL随机引物,1×缓冲液备。(10mmolPLTris2HCl,pH9.0,50mmolPLKCl),1UTaqDNA聚1材料与方法合酶,反应于德国公司制造的Gradient型PCR扩增仪上进行。引物扩增的条件如下:94℃预变性5min,94℃变性11.1供试材料min,36℃复性1min,72℃延伸2min,从变性至延伸共44个杂交组合母本

7、为高感黑胫病的烤烟品种红花大金元,父循环,最后72℃延伸10min。本为本课题组结合辐射诱变技术、细胞工程技术改良筛选的[6,7]1.5数据分析高抗黑胫病的烟草红花大金元突变株系(该抗病突变株系是以60Co2γ射线照射高感黑胫病的优质烟草品种红花大把随机引物OPB02和OPM11对F2分离群体的扩增结金元的花药为诱变手段,用烟草黑胫病疫霉菌粗毒素为筛选果,用MapMakerPEXP3.0作图软件分析,计算其连锁距离。X基金项目:云南省自然科学基金资助项目(2000C0051M)。3作者简介:刘晓

8、侠(1977-)女,江苏人,浙江大学在读博士,主要从事作物遗传育种研究。通讯作者:王荔。Tel:087125227726Received(收稿日期):2003208204,Accepted(接受日期):2003211205.5期刘晓侠等:烟草黑胫病抗性基因Bs1(t)的RAPD标记517性引物,其中抗病亲本、抗病基因池和感病亲本、感病基因池2结果与分析的带型两两相同的可重复的随机引物是OPB02和OPM11,其多态性位置分别在3.0kb和2.5kb处。2.1烟草黑胫病抗性鉴定结果与分析首先对高抗