对4039例妇女HPV感染情况的调查与分析

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1、对4039例妇女HPV感染情况的调查与分析【摘要】目的　了解义乌地区妇女宫颈人乳头瘤病毒（HPV）感染的分布情况，确定本地区的优势型别。方法　采用流式荧光杂交法对4039例妇女进行26种HPV基因型检测，分析宫颈病变中HPV亚型感染分布特点。结果　在被调查的4039例妇女中HPV感染总阳性率为16.4%（661/4039），感染亚型从高到低依次为：16、52、58、33和18，感染率为：16亚型占18.9%；52亚型占16.8%；58亚型占12.5%；33亚型占7.8%；18亚型占6.7%。结论　本地区HPV亚型感染分布以16、

2、52、58、33型为主。【关键词】　人乳头瘤病毒　宫颈癌人乳头瘤病毒（humanpapillomavrius,HPV）是一种具有种属特异性的嗜上皮病毒，属双链闭环的小DNA病毒，大量流行病学研究已证实，HPV的感染与子宫颈癌的关联最为密切，高危型HPV持续感染是发生子宫颈癌的重要原因。HPV感染检测已成为筛查和预防宫颈癌的关键问题之一[1-3]。1　资料和方法1.1资料1.1.1病例来源：2011年1月至6月在我院妇科门诊就诊以及体检中心进行常规体检的妇女4039例（年龄18-78岁）。对所研究病例以年龄段为分组依据，25岁及2

3、5岁以下为一组，61岁及61岁以上为一组，中间年龄每5年为一个年龄段既为一组，剔除二次复查数据。61.1.2标本采集：采集生殖道拭子标本，取样时尽量避免取样不全而造成漏检，标本采集后立即送检。4℃保存不超过24h。1.1.3仪器与试剂：流式荧光杂交法HPV核酸检测试剂盒(上海透景生命科技有限公司)，多功能流式分析仪Luminex100(美国Luminex公司)。HC-2试剂盒(美国Digene公司)。基因杂交信号放大系统DML2000(美国Digene公司)。1.2方法1.2.1抽提DNA：按试剂盒说明进行。1.2.2PCR扩增

4、：扩增HPVDNA的引物是MY09／MYll的改进型，引物为生物素标记，扩增靶区为HPVLI区，产物长度约480bp。此外，还包括扩增人B-珠蛋白编码基因的引物，用于特异性扩增人p-珠蛋白DNA片段。加抽提后的DNA50-100ng到主混合液(MasterMix，含dNTP、M92+、引物混合液、Taq酶、双蒸水)。扩增条件为95℃5min；以下为5个循环：95℃30s，58℃30s，72℃30s；再接35个循环：95℃30s，55℃30s，72℃30s；最后：72℃3min。1.2.3杂交检测：将编码微球与DNA探针混合(探针

5、浓度10umol／L，10ul微球原液)；向检测板的每孔中加入微球-探针杂交液22ul、PCR产物3ul；PCR仪中99℃变性5min，48℃30min使探针-扩增产物结合；向每孔中加入75ul链霉亲和素标记的藻红蛋白(SA-PE)，48℃孵育15min；Luminex多功能流式分析仪检测。表14039例女性年龄分布与HPV感染检出率的关系6注：各年龄组的阳性检出率用X2检验，X2=80.87P<0.01,查差异有统计学意义表2HPV高危亚型检出例数分布情况2　结果2.1从表1中可知，本研究共检测4039例样本，其中阳性病

6、例661例，阳性检出率为16.4%，41-45岁年龄段的阳性百分比最高为16.3%，形成一个最高峰；而56-60岁阳性检出率最高，为36.8%,明显超过平均检出率，说明阳性检出率随着研究病例年龄段的增长，呈现出一种上升的趋势。从表1可以看出各年龄段HPV感染检出率差异有显著性，具有统计学意义。2.2从表2中可知，本研究的4039例样本中HPV感染的阳性病例中，主要以16亚型为主，占18.9%，其次为52亚型，占16.8%，再次为58亚型，占12.5%3　讨论宫颈癌是妇科常见恶性肿瘤之一，其发病率仅次于乳腺癌位居第二位[4]。HP

7、V是一种诱发女性宫颈癌及生殖器病变的主要病源体。在超过95%的早期浸润和浸润性宫颈癌中，至少发现20种致癌HPV亚型。现已明确HPV感染是宫颈上皮瘤变和浸润性宫颈癌发生的重要原因。临床HPV检测对于发现宫颈癌高危患者早期防治有着重要意义。6流式荧光杂交法采用多重PCR技术对检测样品的核酸DNA进行扩增，并用包被有核酸探针的多种编码微球和扩增产物进行杂交，结果用流式点阵仪检测分析。多重PCR可有效扩增WHO确认的HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59和66共13种高危亚型，此外还可以有效扩增其

8、他6种高危亚型（HPV26、53、55、68、82、83）和7种低危亚型（HPV6、11、40、42、44、61、73）.本文利用流式荧光杂交法对本院就诊的女性进行HPV感染亚型筛查，从表2中可见16、52、58亚型明显为较其它亚型检出例数更高，该三种亚型检出例