三种方法应用于人卵巢组织玻璃化冷冻的效果分析

《三种方法应用于人卵巢组织玻璃化冷冻的效果分析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、分类号：R71学校代码：10062密级：学号：2012602607硕士学位论文MASTER’SDISSERTATION论文题目：三种方法应用于人卵巢组织玻璃化冷冻的效果分析TITLEEfficiencyofthreemethodsappliedinthehumanovariantissuevitrification一级学科：临床医学二级学科：妇产科学论文作者：闫惠惠指导教师：张云山天津医科大学研究生院二〇一五年五月分类号：R71学校代码：10062密级：学号：2012602607学位类别：科学学位专业学位学科门类：医学硕士学位论文MASTER’SDISS

2、ERTATION论文题目：三种方法应用于人卵巢组织玻璃化冷冻的效果分析TITLEEfficiencyofthreemethodsappliedinthehumanovariantissuevitrification一级学科：临床医学二级学科：妇产科学论文作者：闫惠惠指导教师：张云山天津医科大学研究生院二〇一五年五月学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论

3、文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。保密，在年解密后适用本授权书。本论文属于不保密。（请在相对应的方框内打“√”）学位论文作者签名：日期：年月日导师签名：日期：年月日天津医科大学硕士学位论文中文摘要目的：卵巢组织冷冻作为女性生育力保存的一种方法，具有广阔的应用及发展前景。目前

4、卵巢组织冷冻仍是一项试验性技术，标准化的冷冻方案尚未确定。本研究初步比较三种不同的冷冻方法对人卵巢皮质组织玻璃化冷冻效果的影响，旨在探讨人卵巢皮质组织玻璃化冷冻的可行方案。材料与方法：收集2014.3～2014.9因卵巢良性囊肿于天津市中心妇产科医院实施手术的40例患者的卵巢皮质块作为实验材料。术中切除的卵巢组织放入装有磷酸盐缓冲液的离心管中，置于冰上半小时内送至实验室。将卵巢皮质切割成大小为5×1×1mm3的组织块，每位患者的卵巢组织块随机平均分为四组：一组作为新鲜对照组，剩余三组作为实验组行玻璃化冷冻。本实验中联合使用低浓度的乙二醇和二甲基亚砜作为玻璃化

5、冷冻保护剂，实验组分别行微滴法玻璃化冷冻、冻存管法玻璃化冷冻、尼龙筛网法玻璃化冷冻，放入液氮保存一周后解冻复苏。观察并计数新鲜组和实验组卵巢组织内各级卵泡数、计算始基卵泡的正常形态率，通过TUNEL法检测卵巢组织细胞凋亡情况，通过免疫组织化学法检测细胞增殖情况，比较并分析四组数据。结果：1.卵巢组织形态学检测结果：微滴法组、尼龙筛网法组与新鲜组相比，总卵泡数及始基卵泡所占比例无统计学差异（P>0.05），冻存管法组的总卵泡数及始基卵泡所占比例明显少于新鲜组，差异有统计学意义（P﹤0.05）。新鲜组始基卵泡正常形态率明显高于三个实验组，差异有统计学意义（2=

6、6.956，P=0.008；2=27.038，P=0.000；2=10.963，P=0.001），微滴法组、尼龙筛网法组始基卵泡正常形态率高于冻存管法组，差异均有统计学意义（2=8.444，P=0.004；2=5.309，P=0.021），微滴法组与尼龙筛网法组始基卵泡正常形态率之间的差异没有统计学意义（2=0.507，P=0.476）。光镜下观察可见实验组部分卵巢组织出现间质水肿、间质细胞连接疏松、颗粒细胞层与卵泡膜之间空隙增大。I天津医科大学硕士学位论文2.TUNEL检测结果：四组卵巢组织中各级卵泡中卵母细胞及颗粒细胞中均未见凋亡细胞，而卵巢间

7、质细胞核内可见凋亡细胞。3.免疫组化Ki67表达结果：微滴法组、尼龙筛网法组Ki67阳性细胞数目与新鲜组比较无统计学差异（P>0.05），冻存管法组Ki67阳性细胞数目明显低于新鲜组，差异有统计学意义（P﹤0.05），微滴法组和尼龙筛网法组相比无统计学差异（P>0.05）。结论：1.本课题为天津市卫生局资助项目，首次全面系统地采用不同冷冻试剂配伍不同冷冻载体对人卵巢组织玻璃化冷冻的效果进行观察评价。本部分实验内容固定冷冻试剂不变，分析并讨论三种冷冻载体应用于人卵巢组织玻璃化冷冻的效果。2.从卵巢组织形态学、细胞凋亡及细胞增殖三个方面判断：微滴法及尼龙筛网法的

8、玻璃化冷冻效果优于冻存管法。3.新型冷冻载体尼龙筛网