人卵巢组织冷冻保存的实验研究

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2、索，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。(保密论文在解密后应遵守此规定)论文作者签名：至盔瞧L导师签名：肥日期：奎丛盟山东大学博士学位论文论文1人卵巢组织冷冻保存的实验研究博士研究生：博士生导师：王利红陈子江教授中文摘要人卵巢组织程序化冷冻的实验研究目的：探讨程序化冷冻对成人卵巢组织中始基卵泡与初级卵泡的形态学、超微结构及凋亡的影响。方法：采集成人卵巢组织，采用慢速冷冻一快速复温的程序法保存，通过苏木素一伊红染色检测冷冻前后人卵巢组织中始基卵泡与初级卵泡的组织形态、使用透射电镜观察两种卵泡中的超微结构，荠用TU

3、NEL法进一步检测冷冻前后两种卵泡的凋一率。结果：1．冷冻前后的人始基卵泡与初级卯泡的组织形态：在冷冻后的人卵巢组织中，形态正常的始基卵泡比例同冷冻前没有显著差异(P>0．05)；形态正常的初级卵泡比例明显低于冷冻前(P<0．05)；冷冻前后形态正常的人始基与初级卵泡比例无显著差异(P>0．05)。2．冷冻前后的人始基卵泡与初级卵泡的超微结构：冷冻后的人卵巢组织中，始基卵泡的卵母细胞圆形居中，核仁清晰，线粒体成堆或散在于卵母细胞浆中，胞浆内出现少量小空泡，卵母细胞膜、核膜及线粒体膜均完整，扁平颗粒细胞排列整齐。在冷冻的初级卵泡中，初

4、级卵泡的卵母细胞膜、核膜及线粒体膜均保持完整．核仁清晰，颗粒细胞排列整齐，线粒体较多，分布在卵母细胞核周围，但部分线粒体发生肿胀或出现空泡，卵母细胞浆及颗粒细胞浆中均出现较大空泡。3．冷冻前后的人始基卵泡与初级卵泡凋亡：冷冻前后的人始基卵泡与初级卵泡的卵泡凋亡主要发生在卯母细胞上，颗粒细胞较少发生凋山东大学博士学位论文亡。冷冻前后的人卵巢组织中，始基卵泡的凋亡率无显著差异(P>O．05)；冷冻后人初级卵泡的凋亡率，较冷冻前比较，也无显著差异(Jp>O．05)。结论：1．程序法冷冻不影响人卵巢组织中始基卵泡的组织形态及超微结构。2．程

5、序法冷冻对人卵巢组织中初级卵泡的形态保存效果不佳。3．程序法冷冻对人卵巢组织中始基卵泡和初级卵泡的卵泡凋亡率无影响。关键词：卵巢组织，低温保存，组织形态，凋亡2山东大学博士学位论文论文II冷冻人卵泡分离与体外培养的实验研究目的：比较冷冻对人卵巢组织中分离的始基卵泡与初级卵泡的活性影响，以及冷冻前后两种卵泡间的活性差异。观察两种卵泡在体外培养过程中的形态学改变，评价人始基卵泡与初级卵泡发育潜能间的差别。方法：采用胶原蛋白酶和DNA酶消化结合机械处理，分离冷冻的后的人卵巢组织的始基卵泡与初级卵泡。采用PI与CFSE双荧光标记，荧光显微镜

6、下观察冷冻前后分离的人始基卵泡或初级卵泡的活性。将分离的冷冻后人始基卵泡及初级卵泡分别种植在胶原三维培养体系中，检测两种卵泡的卵泡直径、卵母细胞直径以及颗粒细胞层数，体外培养24h后，继续观察完整卵泡的上述检测指标的变化。结果：1．冷冻前后人始基卵泡或初级卵泡的活性比较：荧光染色法标记的冷冻后分离的人始基卵泡，存活卵泡的比例与冷冻前比较无显著差异(P>005)。冷冻前后分离人仞级卵泡的存活卵泡的比例比较，也无显著差别(P>0．05)。2．冷冻前或冷冻后的两种卯泡活性间比较：冷冻前分离的人始基卵泡与初级卵泡的存活卵泡比值比较，无统计学

7、差别(P>0．05)：冷冻后分离的人始基卵泡的存活卵泡比例与初级卵泡比较，差别不显著(P>0．05)。3．体外培养的冷冻后人始基卵泡与初级卵泡生长发育情况比较：在三维培养体系中，冷冻后完整的人始基卵泡与初级卵泡不但能够存活而且可以生长发育。培养后的人始基卵泡与培养前比较，卵泡直径及卵母细胞直径增加显著(P<0．05)，颗粒细胞层数增加极显著(P<0．001)。而培养后的人初级卵泡的卵母细胞直径较培养前显著增加(P<0．01)，培养后的卯泡直径及颗粒细胞层数与培养前比较，差别极显著(P<0．001)。4．冷冻后人始基卵泡、初级卵泡及裸

8、卵存活时间比较：体外培养的人山东大学博士学位论文始基卵泡与初级卵泡的存活时间无显著差别(P>O．05)，但培养裸卵的存活时删较两种卵泡显著增加(P