血小板冷冻保存的实验研究论文

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1、血小板冷冻保存的实验研究论文杨惠云田玮郭颖张瑞丽张王刚【摘要】本研究研制新型的血小板冷冻保存液，观察血小板在不同保存液冻存前、后的形态改变，以及体外受凝血酶作用下的活化状态，同时比较添加UDPGal对保存液保存效果的影响。在以往单一应用较高浓度的DMSO为血小板低温保存液的基础上，自行研制新型保存液：2%DMSO+thrombosol+UDPGal，在不同时间分别观察血小板形态及测定血小板膜表面糖蛋白CD62P的表达。结果显示，在圆形、树突形、不规则形态的百分比方面冷冻保存对血小板形态有显著影响，2%DMSO+thrombos

2、ol组和2%DMSO+thrombosol+UDPGal组保护作用优于5%DMSO组；与新鲜血小板相比.freelbosol和2%DMSO+thrombosol+UDPGal对血小板形态的保持效果相似，均优于5%DMSO组。冷冻保存后血小板对凝血酶的反应下降，3种保存液组之间无明显差异。在保存液中添加UDPGal对保存效果没有明显影响。【关键词】血小板；冷冻保存；thrombosol；UDPGal；CD62PExperimentalStudyonCryopreservationofPlateletsAbstractThes

3、tudyorphologyofcryopreservedplateletsindifferentCPAandtheCD62Pexpressiononmembraneofplateletsafterstimulatingbythrombin,asbosolandUDPGalorphologyofchilledplateletsissionelectronmicroscopeandparedembraneofplateletsonths.Theresultsindicatedthatthesignificanteffectofcry

4、opreservationonmorphologyofplateletsbosoland2%DMSO+thrombosol+UDPGalembranedecreasedobviouslyaftercryopreservation,butnotobserveddifferenceatpreservationfor1monthand3months,asong3kindsofdifferentCPA.Itisconcludedthattheprotectiveeffectsof2%DMSO+thrombosoland2%DMSO+th

5、rombosol+UDPGalonmorphologyofplateletsaresimilar,butbetterthanthat5%DMSO.Thereactionofcryopreservedplateletstothrombindecreases,ongthese3kindsofCPA.TheadditionofUDPGaltocryopresevedagentsnotshobosol；UDPGal；CD62P随着强化疗和骨髓移植的迅速开展，血小板的需求量大幅增加。然而冷冻保存后的血小板聚集功能降低，且输注后在血循环

6、中很快被清除［1］，极大地限制了其临床应用。目前广泛使用的同种异体单采血小板仅能在22℃保存5天，且存在细菌污染及10%-20％受者发生无效输注的问题［2，3］。血小板保存时间短，采集成本高，约1/3血小板因过期被弃用，造成巨大浪费。因此，如何长期保存血小板成为医学界面临的难题。本研究采用2％DMSO、thrombosol和UDPGal作为血小板冷冻保存剂，通过电子显微镜观察冷冻前后血小板的形态变化，流式细胞仪检测血小板膜表面糖蛋白CD62P的表达以反映血小板的功能，进而比较不同保护液的作用，以期为今后的临床应用提供实验依据。材

7、料和方法主要试剂二甲亚砜（DMSO）、thrombosol试剂购自Sigma公司，UDP半乳糖（UDPGal）购自Merck公司，CD62PPE单克隆抗体及PE标记的同型单克隆抗体均购自美国BectonDickinson公司。中国实验血液学杂志JExpHematol2007;15(2)血小板冷冻保存的实验研究研究对象健康志愿者30例，他们的血小板计数不低于180×109/L，按照全国血液质量委员会颁布的供血者健康标准检查合格。血小板的采集及冷冻保存用CobeSpectra血细胞分离机（美国产品）采集健康人血小板30份，采集时

8、加入枸橼酸葡萄糖溶液1∶10抗凝，每份血小板含量约为1×1012/L。按以下方法分组保存，每组10份。A组：加5％DMSO；B组：加2％DMSO、thrombosol（成分为阿米洛利0.25mmol/L、腺苷0.1mmol/L、硝普钠50μmol/