海藻糖对液态低温保存血小板保护作用的实验研究论文

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1、海藻糖对液态低温保存血小板保护作用的实验研究论文崔云，刘璐，黄成垠，尹其华,黄鹰［摘要］目的：研究海藻糖对液态低温（4℃）保存血小板的保护作用。方法：采集兔心脏血，按常规方法制备浓缩血小板（CP），在CP中加入不同浓度的海藻糖，4℃储存，用51Cr铬酸钠进行标记后自体回输入兔体内.freeladeintoconcentratedplatelet(CP).CPperatureandloperature+differentdoseoftrehalosefor24h.Plateletsperature.Andorethan50mgml-1.ConclusionTr

2、ehalose，protectingplatelets,canprolongthelifespanofliquidplateletsstoredatloperature.Keyl心脏血，与1.5mlACD抗凝剂混匀，1000rmin-1离心10min；取上层血浆至另一离心管中，再以3000rmin-1离心20min（22℃）；之后将上层血浆移至另一试管中备用，下层血小板中加备用自体血浆1ml，使血小板悬浮。1.2.2储存CP第1组（常温对照组）：将以上制备的CP置于22℃水浴锅中温浴24h；第2组（低温对照组）：将以上制备的CP置于4℃冰箱储存24h；第3～

3、8组：CP中依次加入浓度为20、30、40、50、60及70mgml-1的海藻糖1ml，混匀，37℃水浴锅中温浴后于4℃冰箱储存24h。1.2.3标记血小板取出储存的CP，于室温（22℃）下以3000rmin-1离心20min，弃上清，加生理盐水1ml，使血小板悬浮，然后加入1.11MBqNa251CrO4，37℃水浴锅中温浴45min，其间振荡数次；之后再以3000rmin-1离心20min，弃上清，加备用自体血浆1ml，使血小板悬浮［2］。1.2.4血小板回输将以上标记好的1ml血小板通过兔耳缘静脉自体回输入兔体内，于回输后1、24、48、72h抽取1m

4、l兔耳动脉血，测定放射性计数率，并以1h时血液的放射性计数率作为100%，计算24、48、72h血小板存活率。1.2.5Na251CrO4放射性计数率与标准活度换算根据公式A=lg－1（lgC-b），将测量所得的动物器官组织样本的γ计数率值换算成动物器官组织样本的放射性摄取（ID%g-1）。1.3统计学处理所得数据以±s表示，采用t检验进行统计分析。2结果4℃储存的低温对照组血小板各时间段的存活率非常低，24h存活率只有(6.38±2.88)%,72h时只有（3.86±1.06）%，说明4℃储存的血小板输入体内后寿命很短。加入不同浓度海藻糖4℃24h储存各组

5、（第3～8组）各时间段血小板存活率明显高于4℃储存的低温对照组（P＜0.05），并且随着海藻糖浓度的增加，各时间段存活率也增加，当浓度达到50mgml-1时，24、48及72h存活率分别达到（59.16±2.05）%、（51.95±2.81）%及（40.44±2.43）%，并且超过此浓度，各时间段存活率不再增加，即50mgml-1海藻糖组与60、70mgml-1海藻糖组无明显差异。见表1。表1不同储存条件下血小板的存活率（略）3讨论研究表明，低温下血小板的生理学性质及形态会发生改变，使其被活化、损伤，寿命缩短［1,3］。当它们置于低温下时，形态会从正常的铁饼

6、状变成圆球状，周边形成许多伪足，同时伴有血小板胞浆内的钙离子明显增加，微管解聚，肌动蛋白增加5倍以上。此外，血小板4℃低温保存24h以上会出现а颗粒的聚集和释放，类似于血小板正常生理激活过程，之后血小板几乎失去活性。胞浆内钙离子的迅速增加及骨架肌动蛋白的集结装配，不仅使血小板形态发生异常改变,.freelbranereorganizationduringchilling:implicationsforlongtermstabilizationofplatelets［J］.Cyobiology,2001,43(2):114123.［2］李家增，王鸿利，韩忠朝.

7、血液实验学［M］.上海：上海科学技术出版社，1997：304.［3］GOUSSETK,TSVETCOVANM，CROolBiolCell,2001,12(2):332333.［4］GOUSSETK,,etal.Evidenceforaphysiologicalroleofmembraneraftsinhumanplatelets［J］.JCellPhysiol,2002,190(1):117128.［5］周俊，刘景汉.血小板冻干保存的研究进展［J］.中国实验血液学杂志，2004，12（4）：542545.［6］周俊，刘景汉，欧阳锡林，等.血小板胞内海藻糖测定

8、方法的建立和评价［J］.中国实验血液学杂志，2004