海藻糖对uvb照射皮肤的保护作用及机制研究

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1、海藻糖对UVB照射皮肤的保护作用及机制研究TheProtectiveEffectsandPreliminaryMechanismofTrehaloseonUVB．·IrradiatedInjuriedSkin专业名称：生塑丝堂皇坌王生塑堂学位申请人：墨邀培养单位：箍三至医太堂独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。本人承担

2、本声明的法律责任。学位论文作者签名：哭彬签字日期：擀6月；El学位论文使用授权书声明本人完全了解第二军医大学有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权第二军医大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：星彬签字日期：擀6月多El导师签名：01j-奇签字日期搠y年易月多日目录摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1Abstract⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．3缩略词⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一7—1L—j—．日IJ舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．9第一部分UVB对HaCaT细胞的损伤及海藻糖的保护作用⋯⋯⋯⋯⋯12一、实验材料、试剂和仪器⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．12二、实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．13三、实验结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

4、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．21四、讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．37第二部分海藻糖对UVB照射动物皮肤的保护作用⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯39一、实验材料、试剂和仪器⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．39二、实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一40三、实验结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一43四、讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一49第三部分产海藻糖合成酶的海洋假单胞菌A50产酶工艺研究⋯⋯⋯．51一、实验材料、试剂和仪器⋯⋯⋯⋯⋯

5、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．51二、实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．52三、实验结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．57四、讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一64参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯65发表论文和参与工作情况⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯68致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．69海藻糖对UVB损伤HaCaT细胞及动物皮肤的保护作用实验研究摘要研究目的：

6、1．探讨海藻糖对UVB照射所致HaCaT细胞光损伤的保护作用及其机制；2．观察海藻糖软膏剂对大鼠及小鼠皮肤慢性UVB光损伤的抑制作用；3．对产海藻糖合成酶的假单胞菌A50进行小罐发酵条件及透性化技术摸索。研究方法：1．HaCaT细胞UVB照射损伤模型建立：以波长为315nm的UVB光源为唯一光源，以不同剂量照射HaCaT细胞，再孵育48h后以CTG法检测细胞活性，选择HaCaT细胞50％左右死亡的剂量作为后期研究的照射剂量：2．海藻糖对UVB照射所致HaCaT细胞的防护作用研究：向HaCaT细胞中加入不同浓度

7、的海藻糖，再进行UVB照射，孵育48h后以CTG法检测细胞活性，选择海藻糖的最佳作用浓度；3．海藻糖对UVB照射所致HaCaT细胞的防护作用机制研究：用表达谱芯片分析海藻糖添加组与对照组差异表达的基因并进行qRT．PCR验证，构建差异基因慢病毒并感染细胞，对这些感染细胞再进行紫外照射，检测基因与生存率的关系，通过Westernblot检测1,H2AX的表达与紫外照射、海藻糖添加及基因表达改变的关系。4．海藻糖软膏剂对大鼠及小鼠皮肤慢性UVB光损伤的抑制作用研究：制备海藻糖软膏剂，以昆明小鼠(雄性)和SD大鼠(

8、雄性)为实验对象，均随机分为6组，分别为：阴性对照组，造模组，软膏剂基质组，海藻糖高剂量组，海藻糖低剂量组和阳性对照组。每组5只，背部剃毛裸露皮肤，每天接受UVB照射，其中小鼠照射30d，总照射剂量为86．4J／cm2；大鼠照射46d，总照射剂量为118．8J／cm2。待照射完毕后，小鼠取全血进行血液生化及血常规检测，取背部组织HE染色观察皮肤病理改变，大鼠取背部组织HE染色观察皮肤病理改变。5。对