海藻糖对液态低温保存血小板保护作用的实验研究

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1、海藻糖对液态低温保存血小板保护作用的实验研究崔云，刘璐，黄成垠，尹其华,黄鹰〔摘要〕　　目的：研究海藻糖对液态低温（4℃）保存血小板的保护作用。方法：采集兔心脏血，按常规方法制备浓缩血小板（CP），在CP中加入不同浓度的海藻糖，4℃储存，用51Cr铬酸钠进行标记后自体回输入兔体内，于回输后1、24、48、72h抽取兔耳动脉血，测定放射性计数率，计算24、48、72h血小板存活率，同时设常温对照组及单纯4℃储存的低温对照组进行比较。结果：加入不同浓度海藻糖各储存组的血小板寿命明显长于低温对照组，并且随着海藻糖浓度的增加而延长。结论：海藻糖可延长4℃液态保存血小板的寿命，对血小板具有保

2、护作用。　　〔关键词〕海藻糖；血小板；液态；储存；4℃；51铬　　Abstract：ObjectiveTostudytheprotectionoftrehaloseforliquidrabbitplateletsstoredat4℃tracedby51Cr.MethodsCardiacbloodadeintoconcentratedplatelet(CP).CPperatureandloperature+differentdoseoftrehalosefor24h.Plateletsperature.Andorethan50mg・ml-1.ConclusionTrehalose，p

3、rotectingplatelets,canprolongthelifespanofliquidplateletsstoredatloperature.　　Keyl心脏血，与1.5mlACD抗凝剂混匀，1000r・min-1离心10min；取上层血浆至另一离心管中，再以3000r・min-1离心20min（22℃）；之后将上层血浆移至另一试管中备用，下层血小板中加备用自体血浆1ml，使血小板悬浮。　　1.2.2储存CP　　第1组（常温对照组）：将以上制备的CP置于22℃水浴锅中温浴24h；第2组（低温对照组）：将以上制备的CP置于4℃冰箱储存24h；第3～8组：CP中依次加入浓度为

4、20、30、40、50、60及70mg・ml-1的海藻糖1ml，混匀，37℃水浴锅中温浴后于4℃冰箱储存24h。　　1.2.3标记血小板取出储存的CP，于室温（22℃）下以3000r・min-1离心20min，弃上清，加生理盐水1ml，使血小板悬浮，然后加入1.11MBqNa251CrO4，37℃水浴锅中温浴45min，其间振荡数次；之后再以3000r・min-1离心20min，弃上清，加备用自体血浆1ml，使血小板悬浮〔2〕。　　1.2.4血小板回输　　将以上标记好的1ml血小板通过兔耳缘静脉自体回输入兔体内，于回输后1、24、48、72h抽取1ml兔耳动脉血，测定放射性计数率，

5、并以1h时血液的放射性计数率作为100%，计算24、48、72h血小板存活率。　　1.2.5Na251CrO4放射性计数率与标准活度换算　　根据公式A=lg－1（lgC-b），将测量所得的动物器官组织样本的γ计数率值换算成动物器官组织样本的放射性摄取（ID%・g-1）。　　1.3统计学处理　　所得数据以±s表示，采用t检验进行统计分析。　　2结果　　4℃储存的低温对照组血小板各时间段的存活率非常低，24h存活率只有(6.38±2.88)%,72h时只有（3.86±1.06）%，说明4℃储存的血小板输入体内后寿命很短。加入不同浓度海藻糖4℃24h储存各组（第3～8组）各时间段血小板存

6、活率明显高于4℃储存的低温对照组（P＜0.05），并且随着海藻糖浓度的增加，各时间段存活率也增加，当浓度达到50mg・ml-1时，24、48及72h存活率分别达到（59.16±2.05）%、（51.95±2.81）%及（40.44±2.43）%，并且超过此浓度，各时间段存活率不再增加，即50mg・ml-1海藻糖组与60、70mg・ml-1海藻糖组无明显差异。见表1。　　表1不同储存条件下血小板的存活率（略）　　3讨论　　研究表明，低温下血小板的生理学性质及形态会发生改变，使其被活化、损伤，寿命缩短〔1,3〕。当它们置于低温下时，形态会从正常的铁饼状变成圆球状，周边形成许多伪足，同时

7、伴有血小板胞浆内的钙离子明显增加，微管解聚，肌动蛋白增加5倍以上。此外，血小板4℃低温保存24h以上会出现а颗粒的聚集和释放，类似于血小板正常生理激活过程，之后血小板几乎失去活性。胞浆内钙离子的迅速增加及骨架肌动蛋白的集结装配，不仅使血小板形态发生异常改变,还可以使其膜发生脂相转移,导致侧向分离,使细胞膜通透性增加,一些离子通过离子通道不受控制而进入细胞内,最终结果是出现蛋白变性和水肿、自由基过度产生、细胞骨架改变等现象,使血小板容易被激活。膜侧向分离可形成许多小的集