冷冻干燥保存血小板的实验研究

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1、冷冻干燥保存血小板的实验研究作者：刘景汉，周俊，王冬梅，欧阳锡林，邢颜超，卢发强【摘要】本研究探讨冷冻干燥保存血小板的方法，以获得可长期冻干保存的血小板制品，使之能在常温条件下保存、占用空间小、重量轻、便于长距离运输，能够满足突发事件和战伤救治的需要。在冷冻干燥保存过程中添加血小板可逆性激活抑制剂、DMSO和海藻糖等低温保护剂，进行预处理、冷冻、一级干燥、二级干燥，再水化，并同时测定血小板回收率，凝血酶聚集反应，促凝血功能，CD62p表达率和PAC1表达率等。结果表明：血小板回收率为56.29％，其

2、对凝血酶的聚集反应与对照组无明显差异，对ADP和丙基没食子酸诱导的聚集反应较对照组分别降低49.34％和26.25％，促凝血功能与对照组比较也无统计学差异；冻干血小板CD62p表达率为42.36％，PAC1表达率为2.12％，凝血酶激活后CD62p再表达率为50.88％，PAC1再表达率为54.55％。结论：添加血小板可逆性激活抑制剂，海藻糖和DMSO后的冻干血小板，其聚集活性和促凝血功能与新鲜血小板无明显差异，血小板可逆性激活抑制剂降低了冻干血小板的CD62p表达，增强了冻干血小板的生存能力，因

3、而延长了其生存时间，因此可以该冻干方法为基础进一步提高冻干保存血小板的效率。【关键词】可逆性激活抑制剂ExperimentalStudyonLyophilizationofPlateletsAbstractTheaimofthisstudystorageofhumanplateletsatnormaltemperatureallersizeandlightereetthedemandsinaccidentsande.Humanplateletsetime,therecoveryrateofplate

4、lets,plateletmaximalaggregationinducedbythrombin,coagulationofplatelets,CD62pexpressionandPAC1expressionaximalaggregationinducedbythrombinhadnosignificantdifferencebeta(FPRP),buttheaggregationofplateletsinducedbyADPorpropylgallateFPRP.CD62pexpressionof

5、thelyophilizedplatelets(42.36％)binayenhancethEIrsurvivalabilityandprolongatesurvivaltime.Thereforetheefficiencyoflyophilizingplateletscanbeimprovedbasedonthisfreezedryingprocedure.Key,Sigma公司产品），百维利肽（Bivalirudin,Medicine公司产品）左旋精氨酸（Larginine,Sigma公司产品）

6、，PGE1（商品名保达新）、海藻糖（trehalose)购自南宁中诺生物工程公司）、二甲亚砜（DMSO，天津医药公司产品）。荧光素标记的特异性血小板膜表面抗体及相关多肽：PAC1－FITC，CD62P－PE，CD61－PerCP，MIgGI－PE等购自BectonDickinson公司；RGDS肽和GPRP（GlyProArgPro乙酸盐）购自Sigma公司产品。血小板聚集诱导剂包括：凝血酶（thrombin，Sigma公司产品），二磷酸腺苷（ADP，Sigma公司产品），丙基没食子酸（Pro

7、pylgallate，AnalyticalControlSystems公司产品）。MEK6108K型全自动血细胞分析仪（NihonKohden公司产品），APACT2聚集仪（德国Lanbo公司产品），FACSCalibur流式细胞仪（BectonDickinson公司产品）和CellQuest分析软件，Centrifuge5415D离心机（Eppendorf），Biofuge15R（Heraeus公司产品），台式冷冻干燥机（TFFD1）。实验分组实验为配伍设计，5份PCs，各准备15ml。设对

8、照组和2个实验组，对照组为新鲜富含血小板血浆（FPRP），不进行任何处理。每份PCs分3个试管，2ml/tube，分至各组，剩余的离心（2287×g,15分钟），留取少量血小板血浆（PPP）备用。前处理（海藻糖负载）血小板中加入预处理液，实验组1含海藻糖45mmol/L和DMSO3%，实验组2含海藻糖45mmol/L，DMSO3%，PGE11μmol/L，LArg5mmol/L，Phy0.5mmol/L和Bivaridin0.5μmol/L。将各组样品