卵巢组织玻璃化冷冻保存技术研究

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1、工程硕士学位论文卵巢组织玻璃化冷冻保存技术研究作者姓名葛玉萍学科专业生物工程校内指导教师吴建华教授校外指导教师蒋慧副研究员所在学院生物科学与工程学院论文提交日期2018年3月12日InvestigationonvitrificationofMammalianovariantissuesADissertationSubmittedfortheDegreeofMasterCandidate：GeYupingSupervisor：Prof.WuJianhuaDr.JiangHuiSouthChinaUniversityof

2、TechnologyGuangzhou,China分类号：R71学校代号：10561学号：201220209277华南理工大学硕士学位论文卵巢组织玻璃化冷冻保存技术研究作者姓名：葛玉萍申请学位级别：工程硕士工程领域名称：生物工程校内指导教师姓名、职称：吴建华教授校外指导教师姓名、职称：蒋慧副研究员论文形式：ꇶ产品研发ꇶ工程设计应用研究ꇶ工程/项目管理ꇶ调研报告研究方向：生殖医学论文提交日期：2018年3月12日论文答辩日期：2018年3月17日学位授予单位：华南理工大学学位授予日期：年月日答辩委员会成员：主席：刘建

3、忠委员：张菊梅王菊芳关溯李杉摘要随着恶性肿瘤早期筛查及治疗技术的不断发展，大量年轻女性肿瘤患者生存期延长成为可能，尤其是对于那些在儿童期或青年期诊断为癌症的病人，部分患者可以达到完全治愈。然而，肿瘤治疗时，患者有时必须面对大剂量的化疗、放疗以及根治性妇科手术（切除性腺）治疗，大剂量的化疗及放疗在杀灭肿瘤细胞的同时，也对女性的卵巢产生了很大的毒性，直接破坏生殖细胞，许多年轻女性患者化疗后出现潮热、月经紊乱、闭经等围绝经期症状甚至导致不孕。因此，对于年轻女性肿瘤患者，在积极治疗恶性肿瘤的同时，如何能保护好卵巢功能、提高患

4、者的生活质量，就成为亟待解决的一大问题和难题。作为生育力保存的重要方法之一，当前，多数西方国家已建立了卵巢组织冷冻保存库。截至2016年1月，全球卵巢解冻移植后出生的健康婴儿超过60人，为女性患者提供了生殖保险和必要的内分泌需求。然而，国内由于种种条件等的限制，关于卵巢组织冷冻保存，以及其相关下游技术的研究，目前还处于临床试验研究阶段，如临床应用或推广，还需要更多和更深层次的研究与探讨。本研究以小鼠卵巢组织及女性癌症患者卵巢组织为研究对象，旨在开发一种可适于临床应用的人源卵巢组织玻璃化冷冻保存系统，为临床作参考。目的

5、：探讨采用3种玻璃化冷冻方法和1种改良程序化冷冻方法冻融小鼠卵巢组织和人卵巢组织的冷冻效果，并对冻融后的人卵巢组织进行异种移植，考察体内功能恢复情况，以期开发和确定一种较优的人卵巢组织玻璃化冷冻体系和评价系统。方法：取清洁级6-8周龄雌性C57BL/6J小鼠24只，摘取卵巢后取皮质部分，分别将小鼠卵巢组织随机分为新鲜组、玻璃化冷冻组（VP1、VP2、VP3）和改良程序化冷冻组（mSFM），进行冷冻。冷冻一周后，复苏各组卵巢组织，观察并检测各组卵巢组织形态学、卵泡存活率及体外发育情况，为下期人源样本冷冻复苏提供数据参考

6、。初步获得小鼠实验数据后，经患者知情同意，取妇科手术后病理检查正常的人源卵巢组织共30例，用于考察3种玻璃化方法的冷冻复苏效果及移植后卵巢功能恢复情况。结果：1）我们实验室优化的VP1玻璃化冷冻法对小鼠及人卵巢组织玻璃化冷冻的效果更佳；2）VP1玻璃化冷冻法复苏的人源卵巢组织在免疫缺陷小鼠上异种移植后，各方面指标显示其功能恢复良好。3）在研究过程中，我们建立了一系列体外和体内的功能检测指标，可对人卵巢组织的低温保存效果做较全面和系统的评估。I结论：目前，卵巢组织的冻融后临床应用尚无统一的标准可供参考，女性肿瘤患者的卵

7、巢是否适合冷冻，所冻存的卵巢组织片是否适于移植等都不好评价。本研究通过改进玻璃化冷冻技术和方案，对新鲜和冷冻复苏后以及移植后的卵巢组织进行多方评价、改进并完善了现有的质量评价方法，确定了一种较优的人卵巢组织玻璃化冷冻体系，并建立了一套完善的适于临床应用的卵巢组织冷冻及移植前评价系统。关键词：卵巢组织；冷冻保存；玻璃化冷冻；裸鼠移植；生育力保存IIAbstractWiththedevelopmentofmalignantdiseasedetectionandtreatmentmethods,chancesofsurvi

8、valareincreasingconsiderably,especiallyforthosepatientsdiagnosedwithcancerinchildhoodoradolescent,andsomepatientscanbecompletelycured.Unfortunately,theappliedhigh-dosechemot