慢速冷冻和玻璃化冷冻对人类卵巢组织中卵泡形态的影响

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1、慢速冷冻和玻璃化冷冻对人类卵巢组织中卵泡形态的影响：彭艳，于丛一，李予，麦美琪，冯淑英，杨冬梓，张清学【摘要】　　【目的】比较慢速冷冻、麦管玻璃化冷冻和尼龙网玻璃化冷冻对人类卵巢组织中卵泡形态的影响。【方法】16例人卵巢组织切成薄片随机分配到新鲜卵巢组(A组)、麦管玻璃化冷冻组（B组）、尼龙网玻璃化冷冻组（C组）和慢速冷冻组（D组）后行组织学和电镜检查。【结果】A、B、C、D组中形态正常的原始卵泡比例分别为72.5%±8.4%、65.6%±12.8%、66.1%±11.1%、48.4%±13.3%；形态正常的初级卵泡比例分别为62

2、.0%±13.9%、58.1%±7.9%、59.0%±16.2%、37.0%±14.0%。D组中形态正常的原始卵泡比例和初级卵泡比例均明显低于A、B、C组。B、C组形态正常的原始卵泡比例和初级卵泡比例，与A组相比无统计学差异。B、C组中形态正常的原始卵泡超微结构无明显改变，D组中形态正常的原始卵泡超微结构存在一定程度的改变。【结论】玻璃化冷冻是人类卵巢组织较适宜的冷冻保存方法。【关键词】卵巢组织;慢速冷冻;玻璃化冷冻；卵泡Abstract:【Objective】Toparetheeffectofslooreeffectivepro

3、cedureforhumanovariantissuecryopreservation.【Methods】Ovarianbiopsiesfrom16patientsmthicknesslydistributedintofreshOPs(GroupA),conventional-straesh(GroupC)andsloentGroups.HistologicalandultrastructuralobservationofOPsedaftercryopreservation.【Results】Theproportionsofmor

4、phologicallynormalprimordialandprimaryfolliclesfromGroupA,GroupB,GroupC,andGroupDorphologicallynormalprimordialandprimaryfolliclesfromGroupDGroupA,GroupB,andGroupC.ThedifferenceinproportionsofmorphologicallynormalprimordialfolliclesamongGroupA,GroupB,andGroupCorpholog

5、icallynormalprimaryfollicles.Theultrastructuralstudiesshoordialfolliclesconsiderednormalathistologicalanalysis,therearenodifferenceamongGroupA,GroupB,andGroupC.orefavorablethansloanovariancryopreservation.Keym×2mm×1mm的组织片，随机分配到新鲜卵巢组（A组）、麦管玻璃化冷冻组（B组）、尼龙网玻璃化冷冻组（C组）和慢速冷冻

6、组（D组）。②B组：卵巢组织片浸泡在快速冷冻液中（含有5.5mol/L乙二醇、1.0mol/L蔗糖、100mL/L胎牛血清的磷酸盐缓冲液），在室温下平衡10min用麦管（0.25mL）按3段式法装管，炭粉封口后直接投入液氮中。保存48h后采用3步法依次在含有1.0mol/L蔗糖和100mL/L胎牛血清的磷酸盐缓冲液、0.5mol/L蔗糖和50mL/L胎牛血清的磷酸盐缓冲液、0.25mol/L蔗糖和25mL/L胎牛血清的磷酸盐缓冲液中逐步稀释去除冷冻保护剂，每次平衡时间5min，最后在磷酸盐缓冲液中冲洗2次。③C组：卵巢组织片在快速

7、冷冻液中室温下平衡10min，将卵巢组织片平铺放入尼龙网袋（长2cm、宽2cm、网孔直径80μm），将尼龙网袋直接投入液氮中。保存48h后进行快速复温，复温方法同B组。④D组：卵巢组织片浸泡在慢速冷冻液中（含有1.5mol/L乙二醇、0.1mol/L蔗糖、50mL/L胎牛血清的磷酸盐缓冲液），在0℃平衡30min，装管方法同B组，采用Oktay[3]的慢速冷冻方法保存。将麦管放入程序冷冻仪内，从0℃开始以2℃/min的速度降温至-7℃，平衡10min后进行人工植冰，再以0.3℃/min的速度缓慢降温至-40℃，后以10℃/min的

8、速度降温至-140℃，最后将麦管投入液氮中，保存48h后进行快速复温，以冷冻保护剂的浓度梯度逐步置换冷冻保护剂（含有1.0mol/L乙二醇、0.1mol/L蔗糖、50mL/L胎牛血清的磷酸盐缓冲液，含有0.5mol/L乙二醇、0.1mol/L蔗糖、