抗体纯化工艺中蛋白与配基相互作用的研究

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1、犬ｉｌ裡大學ＤＡＬＩＡＮＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹＯＦＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ工醒硕士享位论文ＭＡＳＴＥＲＡＬＤＩＳＳＥＲＴＡＴＩＯＮ書＾＾！抗体纯化工艺中蛋白与配基相互作用的研究工程领域＿＾＾５１？作者姓名ｉｉＳ－指导教师——程防副教授２０１５年６月Ｓｆｌ答辩日专业学位硕士学位论文抗体纯化工艺中蛋白与配基相互作用的研究－ＡｎｔｉｂｏｄＬｉａｎｄＩｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓｉｎＰｒｏｔｅｉｎＰｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎＰｒｏｃｅｓｓｙｇ作者姓名：李明洋学科、专业：生物工程学号：３１３１８０２６指导教

2、师：程防完成日期：２０１４／５／４大ｓｉ理工大旁ＤａｌｉａｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ独创性说明作者郑重声明：本硕士学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果也不包含为获得大连理，工大学或者其他单位的学位或证书所使用过的材料一工。与我同作的同志对本研究所做的贡献均已在论文中做了明确的说明并表示了谢意。作者签名爲、０（、：逢竭！Ｂ期：ｆ１大连理工大学专业学位硕士学位论文摘要针对治疗型单克隆抗体纯化工艺中

3、的关键问题，本论文利用表面等离子体共振（ＳＰＲ）技术研宄了疏水电荷诱导层析（ＨＣＩＣ）配基与抗体蛋白质的相互作－用，对于表面和溶液的多种因素对相互作用的影响进行了考察。采用自组装技术在金衬底上构建了两种不同密度的ＨＣＩＣ配基表面模型。分别利用Ｘ射线光电子能谱（ＸＰＳ）、Ｘ射线吸收精细结构（ＮＥＸＡＦＳ）、接触角和表面等离子体共振（ＳＰＲ）对表面化学与结构、离子化和蛋白质结合进行了考察。釆用ＳＰＲ技术系统研宄配基密度和溶液因素（如盐浓度、ｐＨ值）对抗体和白蛋白吸附的影响。我们的实验结果表明，配基密度对相互作用的热力学和动力学都有影响。值得注意的是，高配基密度能够

4、提高结合强度，增大吸附速率，降低解离速率并会导致特异性降低。在中性条件下，疏水作用和氢键作用都对蛋白质吸附有很大的贡献，而在酸性条件下则会被静电排斥力超过。此外，本论文通过利用配基对铁磁性纳米颗粒进行修饰构建了新颖的抗体蛋一白分离体系，该体系易于小量、快速分离抗体，对抗体具有定的特异性吸附能－力。以上抗体配体相互作用的研究将有力支撑和推动单克隆抗体分离纯化工艺的优化。关键词：疏水电荷诱导层析；表面等离子体共振；抗体；配基密度；相互作用？ｆＩ抗体纯化工艺中蛋白与配基相互作用的研究Ａｎｔ－ｉｉｂｏｄｙＬｉｇａｎｄＩｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓｉｎＰｒｏｔ

5、ｅｉｎＰｕｒｉｆｃａｔｉｏｎＰｒｏｃｅｓｓ‘ＡｂｓｔｒａｃｔＭｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｉｅｓｓｅｐａｒａｔｉｏｎａｎｄｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｉｓｔｈｅｋｅｙｉｓｓｕｅｓｏｆｔｈｅｐｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｐｒｏｃｅｓｓ，ｔｈｉｓｐａｐｅｒｄｅｓｃｒｉｂｅｓｔｈｅｕｓｅｏｆｓｕｒｆａｃｅｌａｓｍｏｎｒｅｓｏｎａｎｃｅＳＰＲｓｅｃｔｒｏｓｃｏｔｏｓｔｕｄａｎｔｉｂｏｄｌｉａｎｄｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓｆｏｒｐ（）ｐｐｙｙｙｇｈｄ－ｄｔｓｖｅｒｓｔｉｒｏｈｏｂｉｃｃｈａｒ

6、ｅｉｎｄｕｃｔｉｏｎｃｈｒｏｍａｔｏｒａｈ（ＨＣＩＣ）ａｎｉａｌｉｔｉｎｙｐｇｇｐｙ，ｙｉｎｖｅｓｔｉａｔｉｎｇｔｈｅｓｕｒｆａｃｅａｎｄｓｏｌｕｔｉｏｎｆａｃｔｏｒｓａｆｅｃｔｉｎｔｈｅｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ．ｇｇ－ｅｎｓｅｍｅｒｃａ－ＴｗｏｄｉｔｏｄｌｓｕｒｆａｃｅｓｒｅｓｅｎｔｉｎＨＣＩＣｌｉａｎｄｔｏｅｔｈｙｌｒｉｄｉｎｅｙｍｐｇｇ（ｐｐｙ，ＭＥＰ）ｗｅｒｅｒｅａｒｅｄｏｎＡｕｕｓｉｎｓｅｌｆａｓｓｅｍｂｌｔｅｃｈｎｉｅ．Ｔｈｅｓｕｒｆａｃｅｃｈｅｍｉｓｔｒａｎｄｐｐｇｙｑｕｙｓｔｒｕｃｔｕｒｅｉｏｎｉｚａ

7、ｔｉｏｎａｎｄｒｏｔｅｉｎｂｉｎｄｉｎｏｆｓｕｃｈｍｏｄｅｌｓｕｒｆａｃｅｓｗｅｒｅｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄｂ，ｙｐｇＸ－－－ｒａｙｈｏｔｏｅｌｅｃｔｒｏｎｓｅｃｔｒｏｓｃｏＸＰＳｎｅａｒｅｄｅＸｒａａｂｓｏｒｔｉｏｎｆｉｎｅｓｔｒｕｃｔｕｒｅｐｐｐｙ（），ｇｙｐＮＥＸＡＰＳｃｏｎ－（）ｔａｃｔａｎｌｅｔｉｔｒａｔｉｏｎａｎｄＳＰＲｒｅｓｅｃｔ