抗体纯化工艺中蛋白与配基相互作用的研究论

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1、研究生优秀毕业论文大连理工大学专业学位硕士学位论文摘要针对治疗型单克隆抗体纯化工艺中的关键问题，本论文利用表面等离子体共振(SPR)技术研究了疏水电荷诱导层析(HCIC)配基与抗体蛋白质的相互作用，对于表面和溶液的多种因素对相互作用的影响进行了考察。采用自组装技术在金衬底上构建了两种不同密度的HCIC配基表面模型。分别利用X射线光电子能谱(XPS)、X射线吸收精细结构(NE)乙虹S)、接触角和表面等离子体共振(SPR)对表面化学与结构、离子化和蛋白质结合进行了考察。采用SPR技术系统研究配基密度

2、和溶液因素(如盐浓度、pH值)对抗体和白蛋白吸附的影响。我们的实验结果表明，配基密度对相互作用的热力学和动力学都有影响。值得注意的是，高配基密度能够提高结合强度，增大吸附速率，降低解离速率并会导致特异性降低。在中性条件下，疏水作用和氢键作用都对蛋白质吸附有很大的贡献，而在酸性条件下则会被静电排斥力超过。此外，本论文通过利用配基对铁磁性纳米颗粒进行修饰构建了新颖的抗体蛋白分离体系，该体系易于小量、快速分离抗体，对抗体具有一定的特异性吸附能力。以上抗体．配体相互作用的研究将有力支撑和推动单克隆抗体分

3、离纯化工艺的优化。关键词：疏水电荷诱导层析；表面等离子体共振；抗体；配基密度；相互作用万方数据抗体纯化工艺中蛋白与配基相互作用的研究Antibody—LigandInteractionsinProteinPurificationProcessAbstractMonoclonala【1tibodiesseparationandpurificationist11ekeyissuesofthemonoclonalantibodyproductionprocess，thispaperdescribest

4、11euseofsurfaceplaSmonresonaJlce(SPR)spec仃oscopyto咖dyantibodyliga工ldinteractionsforhydrophobiccharge—inductioncllromato伊印hy(HCIC)，anditsVersa_tilit)，i11iIlvestigatingmesurfacea11dsolutionfktorsaf．fectingtheinteractions．Twodensi够modelsu矗acespresenting

5、HCIC1igand(mercamo—etllyl—p妒dine，MEP)werepreparedonAuusingselfaSsemblytecllIlique．Thesurfacechemis姆a11ds仃ucture，ionizationa11dproteillbindmgofsuchmodelsurf．aceswerecharacterizedbyX．rayphotoelec仃onSpec订oscopy(ⅫS)，near-edgeX-rayabso印tionfinestmct吡e州EX：

6、AFS)，contact．an91etitrationandSPR，respectiVely．Theinfluencesof也esu血cea11dsolutionfactors，e．g．，liga工lddensity，saltconcentration锄dsolmionpH，onproteinadsorptionweredeteⅡninedbySPR．OurresultsshowedthatligaIlddenSi母af

7、fectSbo也equilibriumanddynamicaspectSo

8、ftheinteractions．Specifically，denseligalldleadstoincreaSeinbindings廿engtll，rapidadsoq)tion，slowdesorptionandlowspecificity．Inaddition，bomhydrophobici11teractionandhydrogenbondingcontributesigIlificantlytotheproteilladso印tionatneutralpH，、v：hilemeelec仃

9、ostaticrepulsionisovenⅣheh工ledatacidiccondition．ThehydrophobicinteractioniIlM曲concerltrationof1yotropicsahwouldcausetlledraSticco州Formationalchallgesof也eadsorbedprotein．．Inaddition，anovelaIltibodyseparationsystemwaSbuiltusillgmagneticnanopaniclesmodi