帕金森相关蛋白α-synuclein降解和parkin保护作用的研究

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1、SOOCHOWUNIVERSITY论文题目__________帕金森相关蛋白a-synuclein降解和parkin保护作用的研究研究生姓名___________________侯晓g鸟__________指导教师姓名____________________王光辉_________专业名称_______________药理学_____研究方向_____________神经药理_________论文提交日期______2015年5月苏州大学学位论文独创性声明本人郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含

2、其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不含为获得苏州大学或其它教育机构的学位证书而使用过的材料。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人承担本声明的法律责任。论文作者签名：4、4减日期：>/r.〔.if苏州大学学位论文使用授权声明本人完全了解苏州大学关于收集、保存和使用学位论文的规定，即：学位论文著作权归属苏州大学。本学位论文电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。苏州大学有权向国家图书馆、中国社科院文献信息情报中心、中国科学技术信息研究所（含万方数据电子出版社)、中国学术期刊（光盘版）电子杂志社送交本学位论文的复印件和电子文档，允许论文被查

3、阅和借阅，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存和汇编学位论文，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索。涉密论文口本学位论文属在____年__月解密后适用本规定。非涉密论文运-日期；>ir.日期：帕金森相关蛋白α-synuclein降解和parkin保护作用的研究中文摘要帕金森相关蛋白α-synuclein降解和parkin保护作用的研究中文摘要第一部分帕金森相关蛋白α-synuclein新的降解机制的探讨目的：α-突触核蛋白（α-synuclein）是帕金森病（PD）一种重要的致病蛋白，其异常聚集的出现是帕金森病的主要病理特征。因此，及时有效地清除α-synu

4、celin可能是治疗帕金森病的一个潜在方法。本研究目的在于观察线粒体自噬对α-synucelin蛋白降解的作用。方法：体外培养SH-SY5Y和HeLa细胞系，在细胞中建立EGFP-α-synuclein和其突变体EGFP-α-synuclein-A53T过表达模型。采用线粒体分离提取法检测α-synuclein和α-synuclein-A53T在线粒体上的富集情况。加入线粒体解偶联剂carbonylcyanidem-chlorophenylhydrazone（CCCP）、自噬诱导剂雷帕霉素（rapamycin）、自噬溶酶体抑制剂BafilomycinA1等药物处理细胞，运用

5、荧光显微镜观察α-synuclein和α-synuclein-A53T荧光表达的强弱，westernblot检测α-synuclein、α-synuclein-A53T、TOMM20、COXIV等蛋白量的改变。此外在HeLa细胞中分别共转染Flag和EGFP-α-synuclein或EGFP-α-synuclein-A53T；Flag-Parkin和EGFP-α-synuclein或EGFP-α-synuclein-A53T，加入CCCP处理，用荧光显微镜检测α-synuclein和α-synuclein-A53T荧光表达的强弱和westernblot检测α-synucle

6、in和α-synuclein-A53T蛋白水平的变化。利用α-synuclein-A53T转基因鼠模型，喂食含有CCCP处理过的食物，8个月后通过westernblot检测中脑组织α-synuclein的蛋白水平的改变。结果：线粒体分离实验表明α-synuclein和α-synuclein-A53T在线粒体上有富集。SH-SY5Y细胞过表达α-synuclein和α-synuclein-A53T后，加入CCCP诱导线粒体自噬发生，发现α-synuclein和α-synuclein-A53T的荧光强度与对照组相比明显减弱，westernblot检测发现α-synuclein和

7、α-synuclein-A53T的蛋白水平也明显降低。而加入rapamycin（一种自噬诱导剂）并没有引起α-synuclein和α-synuclein-A53T荧光强度和蛋白量的改变。进一步研究发现，CCCP+BafilomycinA1处理时，CCCP引起的I中文摘要帕金森相关蛋白α-synuclein降解和parkin保护作用的研究α-synuclein-A53T蛋白量的减少能够被BafilomycinA1有效抑制。在Parkin缺陷的Hela细胞系中，加入CCCP和rapamycin处理后，不引起α-synu