siah介导的α-synuclein泛素化在其自噬性降解中的作用

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1、硕士专业学位论文论文题目SIAH介导的α-synuclein泛素化在其自噬性降解中的作用研究生姓名刘媛媛指导教师姓名薛寿儒蔡增林专业名称神经病学研究方向神经变性病的基础与临床论文提交日期2013年5月SIAH介导的α-synuclein泛素化在其自噬性降解中的作用中文摘要SIAH介导的α-synuclein泛素化在其自噬性降解中的作用中文摘要+目的(1)观察外源性毒素MPP作用对SIAH活性和α-synuclein泛素化、降解通路的影响。(2)探讨干扰SIAH活性对细胞生存率和α-synuclein泛素化、降解通路的影响。+方法取PC12细胞,分别用0.25mM、0.5mM、1.0mMM

2、PP及1：100（2ug/ml）、1：50（4ug/ml）、1：25（8ug/ml）SIAH-1抗体处理细胞24h，采用MTT法检测细胞+活力，据细胞存活能力选取SIAH-1抗体及MPP作用于细胞的浓度，再按实验要求把++实验分为空白对照组、SIAH-1抗体（1：50）组、MPP(0.5mM)组、MPP+SIAH-1抗体组，上述方法处理细胞24小时后，通过MTT法检测细胞活力，WesternBlot检测α-synuclein、LC3-II、SIAH、E1在蛋白水平表达的变化，荧光定量PCR检测α-synuclein、LC3、SIAH、E1基因在mRNA水平表达的变化。+结果(1)0.25

3、mMMPP组与对照组细胞活力无明显差别(P=0.5570)，差异无统计++学意义，0.5mM和1.0mM浓度MPP细胞活力均较对照组明显下降，尤以1.0mMMPP组最显著；三种不同浓度SIAH-1抗体处理细胞后活性均增加（P均<0.01），且三组+SIAH-1抗体浓度组之间细胞活力无明显差异(P均>0.05)；但在MPP组各浓度SIAH-1抗体处理细胞后细胞活力均明显升高（P均<0.05），以1：25和1：50浓度的SIAH-1抗体效果最为明显(t值分别为5.988，3.766；P值分别为0.001，0.0093)，且此二组间细胞活力无明显差异（P>0.05）。(2)WesternBlo

4、t结果显示：PC12细胞加入SIAH-1抗体后LC3-II、α-synuclein、SIAH（t值分别为3.257，2.387，8.368，P值分别为0.0173，+0.0360，＜0.0001）蛋白水平均下降，E1表达升高（t=5.096，P=0.0049）；MPP处理细胞后，LC3-II蛋白水平明显增加（P＜0.01），E1(t=4.195,P=0.0247)表达也升高，+而再加入SIAH-1抗体后明显降低了由MPP引起的LC3-II表达的增高（P＜0.0001）、+同时明显升高了E1水平（P＜0.01）；另外MPP处理导致α-synuclein、SIAH表达的升高（P均＜0.01）

5、，加入SIAH-1抗体后明显降低了SIAH及α-synuclein的水平（P均＜I中文摘要SIAH介导的α-synuclein泛素化在其自噬性降解中的作用0.0001）。(3)荧光定量PCR结果显示：α-synuclein、SIAH、E1和LC3（P均＜0.05）+基因表达水平较MPP处理前均明显上升，而加入SIAH-1抗体后E1（t=3.515，+P=0.0170）基因水平明显上升，并降低了由MPP引起的α-synuclein、SIAH和LC3（P均＜0.0001）基因表达水平的升高。+结论(1)MPP使SIAH表达增加，导致α-synuclein的单泛素化增强，加剧α-synucle

6、in聚集体的形成，致α-synuclein的清除障碍。(2)加入SIAH-1抗体后可逆转上述结论(1)的病理变化，通过抑制SIAH表达，致α-synuclein的单泛素化障碍，减少α-synuclein聚集体的形成；另外升高E1表达水平，促进未聚集的α-synuclein通过泛素-蛋白酶体通路得到清除。(3)SIAH蛋白在PD的发病机制中起重要作用，是治疗帕金森病的一个重要潜在靶点。+关键词E3泛素链接酶（SIAH）；MPP（1-methyl-4-phenylpyridinium）；α-突触核蛋白（α-synuclein）；帕金森病（Parkinson’sdisease，PD）；自噬（a

7、utophagy）；SIAH抗体（anti-SIAH）作者：刘媛媛指导老师：薛寿儒蔡增林IISIAH介导的α-synuclein泛素化在其自噬性降解中的作用英文摘要TheroleofSIAHintheautophagicclearanceofmonoubiquitinatedα-synucleinmediatedbySIAHAbstract+Objective:(1)Toobservetheroleofexogenoustoxins