帕金森病相关蛋白Parkin、PINK1和mortalin交互作用对线粒体稳态调控研究.pdf

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1、帕金森病相关蛋白parkin、pINKI和mortalin交互作用对线粒体稳态调控研究院系:上海医学院专业:遗传学姓名:杨辉指导教师:刘雯导师组成员:左极刘晓宇完成日期:2011年4月10日目录中文摘要.....................................................……lAbstract.....................................................……3英文缩略语...................................................……5弓}言

2、......................................................……6第一部分ParkinR工NGI结构域突变对其线粒体转位和与P工NKI相互作用影响.…8前言.....................................................……8材料和方法..............……、........……、...............……9实验结果....................................................……20讨论............

3、.........................................……25参考文献....................................................……27第二部分Parkin和mortalin相互作用及对线粒体稳态影响.......……30前言.......................................................……30材料和方法..................................................……32实验结果...........

4、.........................................……41讨论.....................................................……50参考文献.......……‘......................................……52小结........................................................……54综述:Parkin、P工NM、DJ一1和线粒体功能障碍与帕金森病.........……55在读期间发表或待发表文章....

5、................................……61后记....................................................……62复旦大学硕士学位论文中文摘要几汀*了n作为常染色体隐性帕金森病(Parkinson’5disease，PD)常见致病基因之一，编码的蛋白具有泛素E3连接酶活性。Parkin除了通过泛素蛋白酶体途径参与底物降解，还在包括信号传导、氧化应激和线粒体稳态等方面发挥重要调控作用。尸几勃产了nducedputatz’vekz’刀ase了扭力晰7夕作为另一个与常染色体隐性遗传即相关致病基

6、因，编码的蛋白质主要定位于线粒体并具有丝氨酸-苏氨酸激酶活性。P工NKI/Parkin通路在调控线粒体形态和功能上发挥重要作用。Mortalin是主要定位于线粒体并参与线粒体稳态调控的分子伴侣。Mortalin与PD的发病密切相关，主要证据包括PD病人二二tal初基因编码区存在突变和mortalin在PD病人受影响相关脑区中表达水平下降以及mortalin与PD相关蛋白DJ一1/a一Synuclein存在相互作用。通过对携带二ortal初突变的PD病人成纤维上皮细胞进行研究，发现氧化应激的发生、线粒体形态及膜电位异常。然而Parkin、PINKI和mor七al

7、in的相互作用情况及他们参与调控线粒体的具体机制仍然不清。因此在本研究中，我们主要在HeLa细胞中对Parkin和PINKI，Parkin和mortalin之间的相互作用进行研究，并观察他们对线粒体功能的影响。主要方法和结果如下:1)ParkinR工NGI结构域突变质粒构建。利用已构建的编码野生型Parkin质粒作为模板，经重叠延伸PCR方法获得相关R工NGI突变型Parkin质粒并测序证实。2)ParkinRINGI结构域突变对其与PINKI的相互作用和对线粒体转位的影响。免疫荧光结果表明HeLa细胞内转染G即标记的Parkin在胞浆、胞核均有分布，RING

8、I结构域相关突变并未影响其亚细胞定位。