左氧氟沙星对大鼠纤维环细胞的毒性作用的体外研究

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1、授予单位代码10089学号或申请号20122241HebeiMedicalUniversity硕士学位论文科学学位左氧氟沙星对大鼠纤维环细胞的毒性作用的体外研究研究生：白智龙导师：丁文元教授专业：外科学二级学院：第三医院2015年3月河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师（或指导小组）的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获得的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文’第一署名为单位河北医科大学，试验材料、原始数据、申报的专利等知

2、识产权均归河北医科大学所有。否则，承担相应法律责任。研究生签名导师签级学院领导河北医科大学研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。研究生签名^导师签章广年》月々U�目录中文摘要…………………………………………………………………1英文摘要…………………………………………………………………3英文缩写…………………………………………………………………6研究论文左氧氟沙星对大鼠纤维

3、环细胞毒性的作用体外研究前言…………………………………………………………………7材料与方法…………………………………………………………8结果…………………………………………………………………14附图…………………………………………………………………17附表…………………………………………………………………21讨论…………………………………………………………………22结论…………………………………………………………………24参考文献……………………………………………………………24综述喹诺酮类药物及其化合物诱导细胞凋亡的研究进展………29致谢

4、………………………………………………………………………35个人简历…………………………………………………………………36中文摘要左氧氟沙星对大鼠纤维环细胞毒性的作用体外研究摘要目的：探讨喹诺酮类药物对纤维环细胞的作用。方法：这项研究的目的是以离体实验探讨左氧氟沙星对大鼠纤维环细胞的影响。酶消化法来原代培养大鼠的纤维环细胞，贴壁的细胞融合为单层时，用含有EDTA的0.2%的胰蛋白酶消化后传代培养.当细胞传至第3代时，以不含胎牛血清以及酚红的DMEM/F12培养液来培养细胞，按照以下浓度来分组实验，每组为5到6个样本。对照组：以不含左氧氟沙星的

5、培养液处理；30μg/ml组：加入浓度为30μg/ml的左氧氟沙星干预；60μg/ml组：加入浓度为60μg/ml的左氧氟沙星干预，90μg/ml组：加入浓度为90μg/ml的左氧氟沙星干预，细胞培养24小时后，应用：（1）应用倒置相差显微镜来观察大鼠的纤维环细胞形态；（2）用实时定量PCR的法来检测纤维环细胞中的caspase-3蛋白和MMP-3蛋白相关基因表达情况；（3）western印迹法对caspase-3蛋白与MMP-3蛋白定量检测；（4）应用流式细胞学技术来进行大鼠纤维环细胞最终凋亡率的检测。(5)运用MTS方法测定细胞增殖活力

6、，（6）caspase-3活性检测试剂盒检测caspase-3的活性。大鼠的纤维环细胞分别以浓度为（0,30,60,and90μg/ml）的左氧氟沙星处理，随即研究左氧氟沙星对其可能的细胞毒性作用。结果：（1）原代大鼠的纤维环细胞多呈现出多角形与长梭形，且轮廓明显，细胞核呈现出圆形以及椭圆形，细胞质内可见有分泌颗粒,24～48h后细胞可贴壁生长,7～8d细胞即进入其对数生长期,可传6～8代。经左氧氟沙星作用过的细胞可观察出细胞皱缩、空泡形成等凋亡征象。（2）以流式细胞学技术观察大鼠纤维环细胞在不同浓度的左氧氟沙星处理下的细胞形态结果显示，左

7、氧氟沙星在浓度为0μg/ml时大鼠纤维环细胞的凋亡率为2.70%0.32%左氧氟沙星在浓度为30μg/ml时大鼠纤维环细胞的凋亡率为6.41%0.33%,左氧氟沙星在浓度为60μg/ml时大鼠纤维环细胞的凋亡率为9.35%0.64%，左氧氟沙星在浓度为90μg/ml时大鼠纤维环细胞的凋亡率为12.83%0.67%，差异具有统计学意义。即左氧氟沙星是以浓度依赖的方式引起了大鼠纤维环细胞的凋亡率逐渐升高。（3）用caspase-31中文摘要活性检测试剂盒（碧云天）来检测细胞中caspase-3的活性，结果显示在浓度依次为10μg/ml、

8、20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml左氧氟沙星的条件下，细胞caspase-3的活性与对照组相比较分别提高到3.1倍、3.9倍、4.5倍、6.4倍。差异具有统计学意义。