醋酸铅对体外培养nrk细胞的毒性作用及凋亡机理的研究

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1、河南农业大学硕士学位论文醋酸铅对体外培养NRK细胞的毒性作用及凋亡机理的研究姓名：陈渊申请学位级别：硕士专业：临床兽医学指导教师：贺秀媛；袁慧201206河南农业大学2012届临床兽医学硕士毕业论文摘要研究目的：本试验通过研究醋酸铅导致大鼠肾小管上皮细胞(NRK细胞)的氧化损伤程度、细胞凋亡以及线粒体通路在醋酸铅致NRK细胞凋亡过程中的作用，旨在探讨铅对动物肾脏毒性的作用机制，为防治铅中毒提供理论依据。研究方法：体外培养NRK细胞，结晶紫染色观察细胞形态；MTT方法检测细胞生长曲线，于细胞对数生长期加入0，0．5，1．O和2．0洲的醋酸铅作

2、用12h后，MTT法测定细胞增殖率；采用黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(SOD)活力；硫代巴比妥酸(TBA)法测定细胞中丙二醛(MDA)含量；比色法检测细胞中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH．Px)活性：Hoechst33342和AnnexinV-FITC／PI双染法检测细胞凋亡。罗丹明123进行线粒体膜电位检测；分光光度法检测caspase．3，caspase．9的活性，westernblot检测其蛋白表达量；流式细胞仪检测Z-VAD-FMK及Ac．LEHD．FMK对细胞凋亡的抑制作用。结果：NRK细胞在36℃、5％C02环境下生长良好，24

3、．72h为细胞对数生长期。醋酸铅对NRK细胞的IC50为(2．44=￡-0．32)州。试验所选醋酸铅浓度0．5、1．0、2．0州均可通过降低SOD、GSH．Px活性，升高MDA的含量而引起细胞氧化损伤，并呈剂量．效应相关性；可呈剂量依赖性诱导细胞凋亡。研究表明，醋酸锚可通过caspase依赖性的线粒体凋亡途径诱导NRK细胞的凋亡，主要表现在：显著性地降低细胞线粒体膜电位，激活caspase．3，caspase．9蛋白，以及caspase抑制剂Z．VAD．FMK和caspase一9抑制剂Ac．LEHD．FMK显著性抑制醋酸铅所诱导的NRK细胞

4、凋亡。结论：醋酸铅可抑制NPdr＼细胞增殖，降低其抗氧化酶的活性，加快细胞脂质过氧化程度，破坏细胞膜的完整性。另外，醋酸铅致NRK细胞凋亡可能与caspase依赖性的线粒体凋亡途径有关。关键词：醋酸铅；大鼠肾小管上皮细胞：氧化损伤；细胞凋亡；线粒体AbstractObjective：Tostudytheoxidativedamageandapoptosisofratrenaltubularepithelialcells(NRKcells)inducedbyleadacetateandtheroleofmitochondrialpathway

5、onNRKcellsapoptosisinducedbyleadacetate．Theaimofthestudywastoexplorethemechanismofmammalrenaltoxicityinducedbylead，andprovideatheoreticalbasisforthepreventionandtreatmentofleadpoisoning．Methods：ThemorphologyofNRKcellsinvitrowereobservedbyusingcrystalvioletstaining；Growthcu

6、rveofNRKcellsweredetectedbyMTTassay；0，0．5，1．0，2．01．tMleadacetatetreatedfor12hinthelogarithmicgrowthphaseofNRKcells，andcellproliferationwasalsodeterminedbyM1vrmethod；SuperoxideDismutase(SOD)activity，MaleicDialdehyde(MDA)contentandGlutathioneperoxidase(GSH-Px)activityinNRKce

7、llsweremeasuredbyXanthineOxidaseassay，ThibabituricAcid(TBA)assayandColorimetry，respectively；Hoechst33342andAnnexinV．FITC／PIstainingassayswereusedtodetectapoptosis；MeasurementofmitochondrialtransmembranepotentialwasdetectedbyRh123staining；Theactivationandexpressionofcaspase

8、-3．caspase-9weremeasuredbyspectrophotometryandwesternblot，respectively；TheinhibitionofZ—V