藤酮对体外培养星型胶质细胞毒性作用

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1、藤酮对体外培养星型胶质细胞毒性作用作者：刘辉，张筱军，吴强，董兆君【关键词】鱼藤酮；星型胶质细胞；活力；增殖　　摘要：目的观察鱼藤酮对体外培养星型胶质细胞毒性作用的特点。方法体外培养大鼠中脑星型胶质细胞，采用胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫荧光法鉴定。观察染毒星型胶质细胞形态，检测细胞活力，通过生长曲线分析鱼藤酮对星型胶质细胞增殖的影响以及RTPCR检测缝隙连接蛋白(connexin43,CX43)mRNA表达。结果05μmol/L鱼藤酮染毒24h即可引起明显的细胞形态改变；075，10，20μmol/L鱼藤酮染毒时星型胶质细胞活力明显降低，乳酸脱氢酶释放量显著增加；05μmol/

2、L以上鱼藤酮可明显抑制胶质细胞增殖，CX43mRNA表达降低。结论鱼藤酮对体外培养星型胶质细胞可以产生明显的毒性损伤作用，但与神经元比较，星型胶质细胞对相同剂量的鱼藤酮染毒具有更强的耐受能力。　　关键词：鱼藤酮；星型胶质细胞；活力；增殖　　Toxiceffectsofrotenoneonprimaryculturedastrogliainvitro　　Abstract：ObjectiveTostudythetoxiceffectsinducedbyrotenoneonprimaryculturedastroglia.MethodsRatastrogliaorphologicalob

3、servationRNAorphologyol/Lrotenonefor24hours;theviabilityofcellculturesol/Lrotenone;cellproliferationRNAol/Lrotenone.ConclusionDosedependenttoxiceffectsonprimaryculturedastrogliacouldbeinducedbybeingexposedtorotenone,butastrogliahavehighertolerancetothesamedoseofrotenonepareda公司)；胎牛血清培养基(DMEM/F

4、12)(美国Gibco公司)；类标准胎牛血清(兰州民海生物公司)；Tripure(美国Roche公司)；乳酸脱氢酶试剂盒(南京建成生物公司)；四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)(美国Amersco公司)。酶标仪(美国BIORAD公司)；PCR仪(德国Eppendorf公司)；荧光显微镜E600(日本尼康公司)。　　12星型胶质细胞原代培养、纯化和鉴定生后3dSD新生大鼠(第三军医大学大坪医院动物所)；断头取中脑组织，按照　　图1正常星型胶质细胞形态(×100)（略）　　图2原代星型胶质细胞GFAP荧光染色(×100)（略）　　22不同浓度鱼藤酮对星型胶质细胞活力的影响(表1)鱼藤酮浓度越高

5、则细胞活力越低。与正常对照组比较，01，025，05μmol/L鱼藤酮染毒星型胶质细胞活力未见明显降低，而075，10和20μmol/L鱼藤酮染毒星型胶质细胞活力分别下降70%(P　　23鱼藤酮对星型胶质细胞LDH释放的影响鱼藤酮呈浓度依赖性增加LDH释放量，降代细胞活力，当浓度低于075μmol/L时，对细胞损伤较小，当浓度达到075μmol/L以上时，LDH释放量显著增加(P　　24鱼藤酮对星型胶质细胞增殖的影响随着鱼藤酮染毒浓度的增加，细胞增殖受到抑制；05μmol/L鱼藤酮染毒2d后，细胞增殖明显被抑制；10μmol/L鱼藤酮染毒1d后细胞数量即显著低于正常对照组(P　　图

6、3鱼藤酮染毒星型胶质细胞形态(×100)（略）　　表1鱼藤酮染毒星型胶质细胞活力与LDH释放量的变化（略）　　注：与对照组比较，*P　　25鱼藤酮对星型胶质细胞CX43mRNA表达影响(图4)01μmol/L鱼藤酮对星型胶质细胞CX43mRNA表达未见明显影响；而05和10μmol/L鱼藤酮染毒引起CX43mRNA的表达分别降低78%(P　　C：对照组；1：01μmol/L鱼藤酮组；2：05μmol/L鱼藤酮组；3：10μmol/L鱼藤酮组；M：marker　　图4鱼藤酮染毒星型胶质细胞缝隙连接蛋白CX43表达的变化（略）　　3讨论　　本实验结果表明，01μmol/L鱼藤酮染毒时，

7、体外星型胶质细胞的形态改变并不明显，当染毒浓度达到05μmol/L以上时细胞出现圆缩肿胀或脱壁，细胞数量减少。另外，鱼藤酮染毒浓度越高，星型胶质细胞活力越低，LDH释放量越高，并存在明显的剂量依赖关系。但01，025，05μmol/L鱼藤酮染毒时星型胶质细胞活力并未显著下降，LDH释放量增加亦不明显。结果显示，引起细胞活力改变的最小暴露剂量高于引起细胞形态改变的最低剂量，说明体外培养细胞对毒物很敏感，细胞容易脱壁，虽然细胞形态有明显改变，但细胞仍具活力。此外，本室以往