甲泼尼龙减轻水通道蛋白4抗体对体外培养鼠皮层星形胶质细胞和神经元的毒性作用

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1、河北医科大学硕士学位论文甲泼尼龙减轻水通道蛋白4抗体对体外培养鼠皮层星形胶质细胞和神经元的毒性作用姓名：张洁申请学位级别：硕士专业：神经病学指导教师：任士卿201203中文摘要甲泼尼龙减轻水通道蛋白4抗体对体外培养鼠皮层星形胶质细胞和神经元的毒性作用摘’要目的：视神经脊髓炎(Neuromyelitisoptica，NMO)，是一种主要侵犯视神经和脊髓的中枢神经系统炎性脱髓鞘性疾病。多年来医学界对NMO是多发性硬化(MultipleSclerosis，MS)的一种亚型还是一种独立疾病一直存在争议。自

2、从2004年Lennon等发现NMO患者血清中存在一种特异性自身抗体即NMO．IgG，其靶抗原就是水通道蛋白4(AQP4)以来，越来越多的证据表明AQP4抗体不仅是NMO区别MS的特异标志物，而且在NMO发病机制中发挥重要的作用，NM0是一种抗体介导的体液免疫性疾病。在临床上AQP4抗体诊断NMO的敏感性和特异性分别达73％禾D91％，且NMO复发时血AQP4抗体滴度增高，使用免疫抑制剂减少复发的同时也降低AQP4抗体滴度；病理研究表明NMO新鲜病灶中广泛缺乏星形胶质细胞和AQP4染色；体外研究也

3、证实AQP4抗体和星形胶质细胞特异性的结合导致AQP4内陷，增加血脑屏障的通透性，损害钠依赖性谷氨酸传递，产生补体依赖性细胞毒性。但这些体外研究多为纯星形胶质细胞培养或AQP4转染细胞培养，AQP4抗体对混合细胞培养中星形胶质细胞和神经元的毒性作用尚无研究。另外临床研究已经证实小剂量强的松口服能减少NMO的复发，提示肾上腺皮质激素可能通过免疫抑制作用、抗炎、减轻细胞水肿等发挥其对NMO的治疗作用。故本研究通过大鼠皮层原代细胞培养，首先观察不同滴度的NMO患者AQP4抗体阳性血清对大鼠皮层神经细胞的

4、毒性作用；其次探讨甲泼尼龙对AQP4抗体诱导的神经毒性是否有保护作用。方法：1原代培养3天的新生Wistar大鼠大脑皮层神经细胞，分别加入正常对照血清、NMO患者AQP4抗体滴度分别为1：10、1：320、1：1000的血清，培养6小时后使用细胞免疫荧光染色法观察各组星形胶质细胞和神经元的形态学及数量变化。2原代培养3天的新生Wistar大鼠大脑皮层神经细胞，随机分为4组：中文摘要对照组、甲泼尼龙组(O．8um01)、1：1000血清组、甲泼尼龙(O．8um01)+1：1000血清组，分别加入对应

5、的血清或／和甲泼尼龙，培养6小时后使用细胞免疫荧光染色法观察各组星形胶质细胞和神经元的形态学及数量变化。结果：1荧光显微镜下形态学观察，对照组细胞体外形清晰，突起粗壮；加入AQP4抗体阳性血清6h后大鼠大脑皮层星形胶质细胞均可见肿胀，突起减少、缩短及断裂；神经元细胞也出现突起减少、断裂、长度不完整等表现。单独甲波尼龙处理组并不引起明显的星形胶质细胞和神经元形态学变化，而甲波尼龙预处理组能明显减少这种形态学改变。2原代培养的大鼠大脑皮层细胞暴露于不同滴度的AQP4抗体阳性血清6h，结果发现对照组、l

6、：10、1：320和1：1000滴度血清处理组星形胶质细胞数目分别为52．22-4-3．75％、45．83-4-4．82％、35．77士5．91％和24．68-4-3．40％；与对照组相比，其余三组细胞数量均有不同程度的减少，单因素方差分析显示各组之间差异有统计学意义(F值为48．49，P均

7、异有统计学意义(F值为71．41，P均

8、．22．-L3．75％)，差异有统计学意义(P=0．00)，而对神经元数目无明显影响(分别为43．10-a：5．56％并I44．93+2-39％，P=0．42)。结论：1在体外大鼠大脑原代皮层细胞培养中，AQP4抗体阳性血清对星形胶质细胞和神经元有滴度依赖性的细胞毒性作用。2甲泼尼龙预处理可以减轻AQP4抗体阳性血清诱导的大鼠皮层星形胶质细胞和神经元的细胞毒性。．中文摘要3本研究结果支持AQP4抗体涉及NMO的发病机制，也为临床测定AQP4抗体及激素治疗NMO提供了理论证据。关键词