小鼠大脑皮层星形胶质细胞不同体外培养方法的比较

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1、小鼠大脑皮层星形胶质细胞不同体外培养方法的比较【关键词】星形胶质细胞;,离体培养;,反应性星形胶质细胞;bystin　　［摘要］目的:比较离体纯化和培养星形胶质细胞的不同方法，旨在获得高纯度的星形胶质细胞，为进一步研究奠定基础。方法::用原代培养、传代纯化和一次或两次振荡纯化的方法培养星形胶质细胞。结果:原代培养的星形胶质细胞纯度不高;经传代纯化培养后纯度达到99%以上，bystin表达量较少，且能经短时间模拟缺血诱导活性明显增高;经振荡纯化后bystin表达量明显增多，GFAP免疫荧光变亮，能耐受长时间模拟缺血，提示经振荡后星形胶质细胞已经处于“活化”阶段。结论:经过传代Na3VO4

2、，NaF是磷酸酶抑制剂，如果你作的蛋白是磷酸酶建议不要加。Aprotinin,leupeptin,pepstatin是蛋白酶抑制剂比较昂贵，如果没条件，只加PMSF也可以，但必须严格操作，防止蛋白降解。提取的蛋白放－70保存。纯化的星形胶质细胞纯度最高，可以经模拟缺血诱导成反应性星形胶质细胞，因此能更好地反映其在脑中的功能，是研究星形胶质细胞在脑中的功能和反应性星形胶质细胞较好的培养方法。　　［关键词］星形胶质细胞;离体培养;反应性星形胶质细胞;bystin　　Toestablishaculturalmethodofastrocytesbycomparisonofdifferentwa

3、ysofisolationastrocytesfrommousecerebral　　DUFang，WUXiao-mei，ZHULi　　　　（InstituteofNauticalMedicine，NantongUniversity，NantongJiangsu226001，China）　　［Abstract］Objective:Comparingdifferentwaysofisolationandpurifyastrocytesfrommousecerebraltissuetoestablishanoptimalculturemethodofastrocytesforfuturest

4、udyoftheirfunctionsinthebrain.Methods:Toacquirepurifiedastrocytesbyfourusuallyusedculturalmethods:primaryculture，subcultureforthreetimes，shankenovernightonceortwice.Results:Thepurityofprimaryculturewasthelowest，withthemethodofbeingsubculturedforthreetimesthepurest，appear>99%pure.Theexpressionofb

5、ys-tinwaslowandcellabilitycouldbeenhancedbyshort-timedsimulatedischemiawiththesubculturalmeth-od.Astrocytespurifiedbybeingshankenovernightonceortwicehighlyexpressedbystin，immunocytochem-icalstainingwithanti-mouseGFAPwasbrighterandcouldenduresimulatedischemiaforlongertime，whichdemonstratedthatthe

6、astrocytesmighthavebeenactivatedbyshaking.Conclusion:Withthesubculturalmethodwecanacquirethepurestastrocytesinvitro，whichcanbeinducedtoreactiveastrocytesbysimula-tedischemia，andcanbestreflecttheirfunctionsinthebrain.It′sanoptimalmethodtoacquiretheastro-cytesforfuturestudyoftheirfunctionsinvivoan

7、dreactiveastrocytes.　　［Keywords］astrocyte;invitro;reactiveastrocyte;bystin　　在中枢神经系统中，胶质细胞是主要的组成部分，其中星形胶质细胞在中枢神经系统中发挥着多种作用，组成血脑脊液屏障，营养和支持神经元，与神经元突触的发生有着密切联系［1］。星形胶质细胞在形态学上可按突起的形状分为纤维性星形胶质细胞（fibrousastrocyte）与原浆性星形胶质细胞（pro-top