藤酮对体外培养星型胶质细胞毒性作用.doc

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1、藤酮对体外培养星型胶质细胞毒性作用作者：刘辉，张筱军，吴强，董兆君【关键词】鱼藤酮；星型胶质细胞；活力；增殖摘要：目的观察鱼藤酮对体外培养星型胶质细胞毒性作用的特点。方法体外培养大鼠中脑星型胶质细胞，采用胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫荧光法鉴定。观察染毒星型胶质细胞形态，检测细胞活力，通过生长曲线分析鱼藤酮对星型胶质细胞增殖的影响以及RTPCR检测缝隙连接蛋白(connexin43,CX43)mRNA表达。结果05umol/L鱼藤酮染毒24h即可引起明显的细胞形态改变；075,10,20umol/

2、L鱼藤酮染毒时星型胶质细胞活力明显降低，乳酸脱氢酶释放量显著增加；05umol/L以上鱼藤酮可明显抑制胶质细胞增殖，CX43mRNA表达降低。结论鱼藤酮对体外培养星型胶质细胞可以产生明显的毒性损伤作用，但与神经元比较，星型胶质细胞对相同剂量的鱼藤酮染毒具有更强的耐受能力。关键词：鱼藤酮；星型胶质细胞；活力；增殖ToxiceffectsofrotenoneonprimaryculturedastrogliainvitroAbstract：ObjectiveTostudythetoxiceffectsi

3、nducedbyrotenoneonprimaryculturedastroglia・MethodsRatastrogliawereculturedandidentifiedbyglialfibrillaryacidprotein(GFAP).MTTassayandmorphologicalobservationwereusedtoevaluatethetoxicityofrotenoneonastroglia,cellproliferationandtheexpressionofCX43mRNAw

4、eredetectedbygrowthcurveanalysisandRTPCR.ResultsCellmorphologywaschangedafterbeingexposedto05umol/Lrotenonefor24hours；theviabilityofcellcultureswassignificantlydecreasedafterbeingtreatedwith075,10and20Umol/Lrotenone；cellproliferationwasinhibitedandthee

5、xpressionofCX43mRNAwassuppressedobviouslyby05and10umol/Lrotenone.ConclusionDosedependenttoxiceffectsonprimaryculturedastrogliacouldbeinducedbybeingexposedtorotenone,butastrogliahavehighertolerancetothesamedoseofrotenonecomparedwithneurons・Keywords：rote

6、none；astroglia；viability；proliferation鱼藤酮(Rotenone)是典型的线粒体抑制类农药，广泛应用于农业生产中。研究证实，长期接触该类化合物可导致中枢多巴胺神经元损伤，动物产生类似帕金森病的症状，但其具体作用机制尚不完全清楚〔1,2）。星型胶质细胞（Astroglia）是中枢神经系统数量最多、分布最广的胶质细胞，在神经系统发育、突触传递、神经组织修复与再生、神经免疫以及多种神经疾病的的病理机制等方面都起着十分重要的作用。在病理条件下，功能改变的星型胶质细胞可能是

7、帕金森病等神经退行性疾病发生、发展的始动因素或促进因素（3L本研究以原代培养星型胶质细胞为试验对象，观察体外鱼藤酮染毒对星型胶质细的毒性效应特点，以期为探讨神经退行性疾病的发病机制提供依据。1材料与方法11主要试剂和仪器鱼藤酮（美国Sigma公司）；胎牛血清培养基（DMEM/F12）（美国Gibco公司）；类标准胎牛血清（兰州民海生物公司）；Tripure（美国Roche公司）；乳酸脱氢酶试剂盒（南京建成生物公司）；四甲基偶氮嗟哩蓝（MTT）（美国Amersco公司）。酶标仪（美国BI0RAD公司）

8、；PCR仪（德国Eppendorf公司）；荧光显微镜E6OO（0本尼康公司）O12星型胶质细胞原代培养、纯化和鉴定生后3dSD新生大鼠（第三军医大学大坪医院动物所）；断头取中脑组织，按照文献（4〕方法分离和纯化星型胶质细胞，经3次传代后即可得纯化的星型胶质细胞。星型胶质细胞鉴定采用免疫荧光法检测胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达。一抗为兔抗鼠GFAP(1:100)抗体，二抗为异硫氤酸荧光素(FITC)标记的羊抗兔IgG(l:50),荧火显微镜下，以490nm波长的激发光