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《贫铀对体外培养成骨细胞的毒性作用》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、摘要：［目的］研究贫铀(depleteduranium,DU)对体外培养大鼠成骨细胞(osteoblast,0B)的毒性损伤作用，为DU对骨损伤防治提供依据。［方法］分离并培养原代成骨细胞，分别给予不同浓度(0.00195〜0.0312mg/ml)的DU溶液，卩塞呼蓝(MTT)法检测细胞增殖率以观察DU对0B增殖的影响；对硝基苯磷酸二钠盐(PNPP)法测定细胞裂解液中碱性磷酸酶(ALP)活性以观察DU对0B分化能力的影响；矿化结节形成能力和面积测定以观察DU对0B矿化能力的影响。［结果］DU处理组0B增殖率、ALP活性均呈不同程度降低，且随着DU染毒剂量的增
2、加和时间的延长，DU对0B增殖率和ALP活性的抑制作用更加明显，其中0.0078、0.0156>0.0312mg/ml等染毒剂量组与正常对照组相比，差异有统计学意义(P关键词：贫铀；成骨细胞；增殖；分化；矿化能力StudiesontheToxicEffectsofDepletedUraniumonOsteoblastinVitroXIANGXi-qiao,ZHUGuo-ying*,WANGLi-hua,YANMin-fen,CHENXiao(InstituteofRadiationMedicine,FudanUniversity,Shanghai200032
3、,China)Abstract：[Objective]Tostudytheacutetoxiceffectsofdepleteduranium(DU)onratosteoblast(OB)invitro・[Methods]Osteoblastswereisolatedfromratcalvariaandculturedinvitro,thentreatedwithdifferentconcentrationofDU(0.00195〜0.0312mg/ml)respective!y.Osteoblastprolifereationwasassessedwith
4、MTT,alkalinephosphataseact:ivityofosteoblastswasmeasuredwithPNPP,andthecapacityofmineralizationwasinvestigatedbycourt廿ngtheareaofbonenodules・[Results]Comparedwithcontrolgroup,theproliferationandthealkalinephosphataseactivityofosteoblastwereinhibitedinDUtreatmentgroups,withsignifica
5、ntlylowerlevelsobservedin0.0078mg/mb0.0156mg/mland0.0312mg/mlDUtreatmentgroups(p1.2.2成骨细胞的鉴定用倒置相差显微镜观察成骨细胞形态，NBT/BCIP染色试剂盒进行细胞ALP染色，显微镜下观察拍照。1.2.3DU对成骨细胞增殖的影响(MTT法)将第2代对数生长期细胞以2.5X103/孔接种于96孔板，每组12复孔。待细胞汇合后染毒。DU染毒剂量分别为0.00195、0.0039、0.0078、0.0156、0.0312mg/ml,对照组加入相同体积的生理盐水（空白对照）或低浓
6、度HNO3（HNO3对照即试剂对照）。继续在5%CO2、37°C的恒温培养箱中培养24、48、72h后终止培养。测定前4h,用PBS冲洗后更换无血清MEM培养液100UI,同时加入10UI0.5%MTT,培养箱中孵育4h,加入150PllO%SDS,37°C水浴振荡2h,冷却至室温后在酶标仪上570nm处测定每孔的吸光度值（D570）o结果与空白对照和HNO3对照比较。1.2.3DU对成骨细胞ALP活性的影响（PNPP偶氮法）细胞接种同增殖率测定。DU染毒剂量分别为0.00195>0.0039、0.0078>0.0156>0.0312mg/ml,对照组加入相
7、同体积的生理盐水（空白对照）或低浓度HNO3（HNO3对照即试剂对照）。继续在5%CO2、37°C的恒温培养箱中培养24、48、72h后终止培养。弃去培养液，PBS冲洗3次，每孔加入0.05%Triton-x100»1超声裂解。取细胞裂解液50»1于4°C预冷的96孔板，再加入150口1的ALP底物反应液（PNPP-DEA溶液），然后于37°C恒温振荡箱中放置30min,以NaOH0.1mol/L终止反应，酶标仪在405nm处测定每孔的吸光度。值（D405）o另取4»1细胞裂解液，按照BCA法蛋白定量检测试剂盒说明进行蛋白定量检测。ALP活性最终以U/mg蛋
8、白表示。结果与空白对照和HN03对照比较。1.2.3
