尼古丁对牙周膜成纤维细胞(PDLFS)的细胞毒性和作用机制研究

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1、山西医科大学硕士学位论文尼古丁对牙周膜成纤维细胞（PDLFs）的细胞毒性和作用机制研究姓名：曹艳申请学位级别：硕士专业：口腔医学指导教师：罗晓晋;陈显久20100501山西医科大学硕士学位论文说明尼古丁对PDLFs细胞有增殖抑制作用、细胞周期阻遏作用和促凋亡作用。2、尼古丁对PDLFs细胞线粒体信号通路的影响尼古丁作用于PDLFs细胞24h后，细胞内Ca2+荧光强度显著增加，且随着尼古丁剂量的增加，细胞内Ca2+荧光强度值随之增高(r=0．747、F：41．333、P=O．000)；Bcl．2的In][州A表达水平与正常对照组比较显著下调，而BaX的表达水平上调，且随着剂量的增加细胞内B

2、cl．2转录随之降低(F0．851、F=80．014、P=0．000)，而BaX转录随之增高(r=0．96l、F=341．270、P=O．000)；CaSpase3基因转录增加，且随着尼古丁剂量的增加，CaspaSe3的基因转录呈逐渐增高趋势(r=0．935、F=318．37l、P=0．000)。同时，Caspase3蛋白表达增加，且随着尼古丁剂量的增加，CaSpase3蛋白的翻译水平表达呈逐渐增高趋势(r=0．677、F=8．459、P=0．016)。说明尼古丁可引起PDLFs细胞外Ca2+内流，胞内【Ca2+】增加，Bcl．2基因表达显著减低而Bax的表达水平上调，引起CvtC释放，

3、PDLFs细胞凋亡发生。3、P13科Akt信号通路在尼古丁致PDLFs凋亡中的保护作用不同浓度的尼古丁作用于PDLFs细胞24h后，P13K的表达水平上调，且随着剂量的增加，P13K的基因表达水平呈逐渐增高趋势(r=0．675、F=8．379、P=O．016)；Akt的表达水平下调，且随着尼古丁剂量的增加，Akt的基因表达水平呈逐渐降低趋势(F0．989、F：442．819、P=0．Ooo)：舭在各实验组1’llr308、Ser473位点磷酸化磷酸化显著高于对照组(P<0．01)；Caspase3基因转录增加，且随着尼古丁剂量的增加，CaSpase3的基因转录呈逐渐增高趋势(r=0．93

4、5、F=318．37l、P=0．000)。同时，Caspase3蛋白表达增加，且随着尼古丁剂量的增加，CaSpaSe3蛋白的翻译水平表达呈逐渐增高趋势(r=O．677、F=8．459、P=O．016)。说明P13眦t参与了尼古丁诱导的PDLFs细胞凋亡的过程，并且发挥了抑制凋亡发生的作用，但是尼古丁诱导的PDLFs细胞凋亡的促进因素的作用效果强于P13刚Akt信号通路的作用，而使CaspaSe3表达增加，发生了凋亡事件。研究结论l、尼古丁对PDLFs细胞具有细胞毒性，主要表现为的生长增殖抑制、细胞周期阻滞于GoGl期和促凋亡作用。2、尼古丁诱导人PDLFs细胞凋亡的发生机制是共同激活了尼

5、古丁的促凋亡的线粒体信号转导通路和抑制凋亡的P13列心信号转导通路，其结果是共同导致了凋亡执行蛋白Caspase3的表达增加而发生了PDLFs细胞凋亡事件。关键词：尼古丁；牙周膜成纤维细胞／PDLFs；细胞毒性；信号转导通路lI山西医科大学硕士学位论文Researchaboutnicotine’stoxicityanditsmechanismonperiodontalligamentfibroblasts(PDLFs)AbstractBackgrOundNicotine，maincytotoxicit)rcomponentofcigareete，cancausemaIlydiseases

6、．Signalingpathwaysonapoptosisarewell—maturedmechanismofcellregulationofIlicotine．Althoughmec”otoxicityofperiodontaltissuef．romnicotineareknown，therearenostudyon印叩tosismechaIlismofperiodontaldiseaSecausedbynicotine．ObjectiVeToconfime1licotine’scytotoxicityonh砌anPDLFs，a11dtoresearchitsc”otoxicityme

7、chanismbycl撕聊ngthesigIlaltr觚sductionpathway．T11eresearchwast0layabasisforthepreVentionandmerapyofperiodontaldisease．MethodSCellculture：humanperiodontallig锄entfibroblasts．Prolif-erationsonperiodontallig锄ent舳roblastswere