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《mtt法评价国产氧氟沙星对兔角膜上皮细胞体外毒性的初步研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、MTT法评价国产氧氟沙星对兔角膜上皮细胞体外毒性的初步研究中国新药杂志1999年第6期第8卷实验研究作者：成旋 张舒1单位：(成都市第六人民医院眼科，成都610051)关键词：MTT法；氧氟沙星；兔角膜上皮细胞；毒性 摘要 目的：探讨氧氟沙星眼科用药的毒性,为临床应用此药物提供参考。方法：体外原代培养兔角膜上皮细胞，于培养d4加入不同浓度氧氟沙星继续培养4h，用MTT法测定细胞抑制百分率。结果：氧氟沙星对原代培养兔角膜上皮细胞的半数抑制浓度为11.9mg/ml。结论：现临床上使用的氧氟沙星眼科制剂的浓
2、度对兔角膜上皮细胞是安全的。PRELIMINARYsTUDYONINVITROTOXICITYOFOFLOXACININCORNEAL ePITHELIALCELLSOFRABBITBYMTTASSAYChengXuan,ZhangShu(Departmentofophthalmology,The6thHospitalofChengduCity,Chengdu610051) ABSTRACT OBJECTIVE：Toexploretheinvitrotoxicityofofloxcinophthal
3、micpreparationincornealepithelialcellsofrabbitbyMTTassay.METHODS:Thecornealepithelialcellsofrabbitwereexposedtoofloxacinsolutionsofdifferentconcentrationfor4hatthefourthdayofcultureandtheinhibitionratesofcellsweredeterminedbyMTTassay.RESULTS:TheIC50(mean
4、inhibtoryconcentration)ofofloxacinincornealeptihelialcellsofrabbitwas11.9mg/ml.CONCLUSION:theofloxacinophthalmicpreparationsusedinclinicalpracticearesafeforcornealepithelialcellsofrabbit. KEYwORDS MTTassay;Ofloxacin;Primaryrabbitcornealepithetialcells;T
5、oxicologicaleffect 本文利用溴化四唑蓝(MTT)法就国产氧氟沙星对兔角膜上皮细胞体外毒性作一初步探讨，为临床应用此药提供参考。 材料和方法 1 试剂与药品 细胞培养液DMEM(SIGMA,No.D6046),胎牛血清(FCS,GibcoBRL,No.16000-044)，MTT(SIGMA,No.M5655)用生理盐水稀释成5mg/ml,0.25%胰酶-EDTA溶液(SIGMA,No.T4049),二甲基亚砜(DMSO,分析纯,成都化学试剂厂)。氧氟沙星原料药(湖北宜昌制药厂,
6、批号:921205,含量为99.90%),实验前用饱和NaHCO3液溶解,然后用DMEM(含10%FCS)液配成相应浓度。 2 兔角膜上皮细胞的制备 参照谢立信等［1］的方法，健康大白兔2只，雌雄不限，处死后立即摘除双侧眼球，置1％庆大霉素生理盐水液中浸泡30min。在超净工作台内将眼球置培养皿中，仔细剪取完整角膜，用4＃针头在上皮面划痕,0.25%胰酶-EDTA溶液消化10min,最后用消毒打孔器(Φ6mm)取相同面积角膜片7片。 3 兔角膜上皮细胞的培养及毒性实验 2块24孔板(Cornin
7、gCo.)(1#板、2#板),每天使用2块板的1个纵行,共8个孔。d1将7片角膜片分别放入1#板的第1纵行的4个孔(A1,B1,C1,D1孔)和2#板第1纵行的3个孔(A1,B1,C1孔),角膜上皮面向下,紧贴孔底,加DMEM培养液(含10%FCS)0.5ml/孔,在37℃，5%CO2培养箱内培养24h,d2将7片角膜移入第2纵行,如此每天移走角膜片并接种角膜片在下1纵行,连续6d,以后每天每纵行的处理均依次按第1纵行进行。 移走角膜片的第1纵行每孔加DMEM培养液(含10%FCS)1ml继续培养至第
8、48h,d3用DMEM培养液(不含10%FCS)轻轻冲洗,然后加DMEM(含10%FCS)1ml继续培养至第72h,d4用DMEM(不含10%FCS)冲洗后,加含氧氟沙星的DMEM培养液(含10%FCS)2ml,使每孔终浓度分别为10000μg/ml(A1孔)、1000μg/ml(B1孔)、100μg/ml(C1孔)、10μg/ml(D1孔)、1μg/ml(2#板A1孔),2#板的B,C行作空白对照(不作药物处理),D行作调零对照(检测时只
