外源性硫化氢对tgf-β_1诱导人胚肺成纤维细胞转化的影响及其可能机制

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1、分类号Ｒ５６３密级公开ＵＤＣ６１０学校代码１０巧５義＃义索硕ｄｂ学位论文（专业学位）ＴＧＦ－外源性硫化氨对Ｐ１诱导人胆肺成纤维细胞转化的影响及其可能机制研究生姓名：朱玉凤指导教师、职称：何振华教授专业学位类别（领域）：临床医学（内科学）研究方向：肺纤维化所在学院：第二临床医院二〇—五年五月ＵＮＩＩＶＥＲＳＩＴＹＯＦＳＯＵＴＨＣＨＮＡＴＧＦ－诱导外源健硫化義对ｐ１人胚肺成坪维细胞採化的影响及其可能机制论文作者

2、签名：如巧指导教师签名：１：论文评阅人化科雄，硕导，第Ｓ軍睽大坪医院，副教巧２一评阅人：郭沐良医院，教暢，硕导，軍庆侯科大学附评阅人３；答辩委员会主席：张明亮，南华大学附二戾院，教授，硕导１委员：奉婷婷，丰件戾师，南坐大举附二医院一委员２：刘蠢，教授，硕导，南华大学附医院委员３；曾高峰，教授，硕导，南华大学附二戾院委员４：张秀峰，副教按，硕导，南単大学附二戾院５委员；委员６：答辩日期；２０１５年５月１６白南华大学学位论文原创性声明本人声明，

3、所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加Ｗ标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得南华大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。作者签名：至］２如你年＾月八日＾｜南华大学学位论文版权使用授权书本学位论文是本人在南华大学攻读（博／硕）±学位期间在导师指导下完成的学位论文。本论文的研究成果归

4、南华大学所有，本论文的研究内容不得Ｗ其它目单位的名义发表。本人同意南华大学有关保留、使用学位论文的规定Ｐ：学校，有权保留学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可Ｗ公布学位论文的全部或部分内容，可１＾采用复印、缩印或其它手段保留学位论文；学校可根据国家或湖南省有关部口规定送交学位论文。同意学校将论文加入《中国优秀博硕±学位论文全文数据库》，并按《中国优秀博硕±学位论文全文数据库出版章程》规定享受相关权益。同意授权中国科学信息技术研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过

5、网络向社会公众提供信息服务。对于涉密的学位论文，解密后适用该授权。作者签名巧加Ｃ年ｒ月日／导师签名：年＾月／ｔ日如ｌｙ外源性硫化氢对TGF-β1诱导人胚肺成纤维细胞转化的影响及其可能机制摘要目的：探讨外源性硫化氢对人胚肺成纤维细胞(humanfetallungfibroblast,HFL-F)转化的影响及其可能的机制。方法：体外培养HFL-FMRC-5细胞至对数生长期，先加入TGF-β1(10μg/L)作用12h后，再加入不同浓度的硫氢化钠（H2S的供体）作用一定时间，采用MTT比色法检测细胞的增

6、殖，绘制12h、24h、48h时间点的增殖曲线图，测定NaHS对肺成纤维细胞增殖的影响，挑选出NaHS最合适的作用浓度。把接种在培养瓶里的细胞随机分为4组：对照组：细胞使用MEM/NEAA培养基加10％FBS(Hyclone)培养；TGF-β1组：正常培养的HFL-FMRC-5细胞加入TGF-β1(10μg/1)作用24h；NaHS组(H2S供体)：用最适浓度的硫氢化钠加入HFL-FMRC-5，刺激24h；NaHS+TGF-β1组：用TGF-β1(10μg/l)预先处理HFL-FMRC-512h，再加入最适浓度硫

7、氢化钠共孵育24h。以上各组细胞，用Westernblot法检测ρ-Smad2/3和Smad3蛋白在0min、15min、30min及60min的表达水平，检测24小时后α-SMA、I型胶原蛋白的表达水平。应用倒置相差显微镜观察正常细胞和加入TGF-β1(10μg/1)刺激后的细胞形态学变化，并在0h、12h、24h、48h照相记录。结果：1.通过倒置相差显微镜可以看到，TGF-β1刺激后，肺成纤维细胞从多突的纺锤形或星形结构，逐渐转化为扁平状纤维结构的肌成纤维细胞，随着时间的延长，细胞增殖明显。I2.与对照组相

8、比，TGF-β1刺激肺成纤维细胞12h后，加入不同浓度的硫氢化钠（H2S的供体），细胞的增殖出现不同程度的减弱；与12h、48h组相比，24h组存活率最大，提示硫氢化钠在50μmol/L~1200μmol/L浓度时对TGF-β1体外诱导肺成纤维细胞增殖有抑制作用，且存在一定的时间和剂量相关性。3.与TGF-β1组比较，NaHS组及TGF-β1+NaHS组肺成纤维细胞α-S