黄芩素对tgf-β1体外诱导肺成纤维细胞向肌成纤维细胞分化的影响

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1、硕士学位论文（2013届）黄芩素对TGF-β1体外诱导肺成纤维论文题目细胞向肌成纤维细胞分化的影响研究生姓名董丽霞指导教师姓名顾振纶教授蒋小岗副教授专业名称药理学研究方向肺纤维化和中药药理论文提交日期2013年4月1黄芩素对TGF-β1体外诱导肺成纤维细胞向肌成纤维细胞分化的影响中文摘要黄芩素对TGF-β1体外诱导肺成纤维细胞向肌成纤维细胞分化的影响中文摘要目的:研究黄芩素(Baicalein,BAE)对TGF-β1体外诱导肺成纤维细胞向肌成纤维细胞分化的影响，并初步探讨其作用机制。方法:体外培养人胚肺二倍体成纤维细胞WI-38，制备TGF-β1诱导肺成

2、纤维细胞WI-38向肌成纤维细胞分化的细胞模型。采用MTT法检测WI-38细胞的增殖率，WesternBlot法检测细胞内α-平滑肌肌动蛋白(α-smoothmuscleactin,α-SMA)、I型胶原蛋(CollagenI,ColI)及相关蛋白表达的变化，光学显微镜观察细胞形态，免疫组化检测细胞内α-SMA蛋白表达。随后在TGF-β1体外诱导肺成纤维细胞WI-38向肌成纤维细胞分化的细胞模型上，给予不同剂量的BAE干预，用MTT法检测BAE对WI-38细胞的增殖的影响，免疫组化法观察WI-38细胞内α-SMA、Smad2蛋白的表达，透射电镜观察WI-

3、38细胞中细胞器的结构改变，扫描电镜观察WI-38细胞表面结构改变。WestornBlot检测WI-38细胞分化过程中相关蛋白α-SMA、ColI、Smad2、p-Smad2、Smad3、p-Smad3、Smad7蛋白的表达，以ReverseTranscriptionPCR法检测BAE对TGF-β1体外诱导肺成纤维细胞WI-38细胞向肌成纤维细胞分化过程中α-SMA、ColI、Smad2、Smad3、Smad7mRNA表达的影响。结果：MTT法检测表明：与正常WI-38细胞组相比，5~40μg·L-1TGF-β1作用WI-38细胞4d后，细胞增殖率上升(

4、P<0.05,P<0.01)，呈剂量依赖性；光学显微镜下可见：细胞增殖显著，细胞形态改变，从较大的纺锤形或星形结构的成纤维细胞分化为扁平状纤维结构的肌成纤维细胞，分化明显；免疫组化荧光检测显示：正常WI-38细胞组α-SMA蛋白仅在细胞核内表达，模型组α-SMA蛋白在细胞核与胞浆内均表达；WesternBlot结果：TGF-β1体外诱导4d后，WI-38细胞内α-SMA、ColI蛋白的表达均上调，这一结果与免疫组化结果一致；与TGF/Smads信号通路相关的Smad2、Smad3蛋白表达均上调，并使其磷酸化(P<0.01,P<0.05)。由此表明在本实验

5、条件下，TGF-β1体外诱导WI-38成纤维细胞能分化为肌成纤维细胞的细胞模型，该作用可以维持3d。I中文摘要黄芩素对TGF-β1体外诱导肺成纤维细胞向肌成纤维细胞分化的影响BAE干预下，光学显微镜观察结果：TGF-β1诱导WI-38细胞分化过程中细胞增殖作用被明显抑制；免疫组化显示：α-SMA蛋白在WI-38细胞包浆内表达减少，Smad2蛋白在WI-38细胞核内表达减少；透射电镜观察表明：WI-38细胞线粒体肿胀减少，髓鞘样变改善；扫描电镜观察显示：WI-38细胞表面微绒毛减少，褶皱较少出现；WesternBlot结果：WI-38细胞中α-SMA、Co

6、lI蛋白的表达下调(P<0.01,P<0.05)，同时与TGF-β/Smads信号通路相关的Smad2、p-Smad2、Smad3、p-Smad3蛋白的表达下调(P<0.01,P<0.05)，而Smad7蛋白表达上调(P<0.05)；RT-PCR结果：TGF-β1体外诱导WI-38细胞向肌成纤维细胞分化α-SMA、ColI、Smad2、Smad3mRNA的表达下调(P<0.01,P<0.05)，Smad7mRNA的表达上调(P<0.05)，由此提示BAE可抑制WI-38细胞分化。结论：BAE对TGF-β1体外诱导肺成纤维细胞向肌成纤维细胞的在分化过程有一

7、定的抑制作用，该作用与抑制Smad2/3磷酸化及其细胞核转位，上调Smad7，从而下调α-SMA、抑制细胞内胶原合成并干预TGF-β/Smads信号通路有关。关键词：黄芩素；成纤维细胞；肌成纤维细胞；肺纤维化；α-SMA；WI-38；TGF-β1；胶原蛋白；TGF-β/Smads信号通路；作者：董丽霞指导教师：顾振纶教授蒋小岗副教授IIEffectsofbaicaleinonTGF-β1-inducedfibroblasttomyfibroblastdifferentiationinvitroAbstractEffectsofbaicaleinonTGF

8、-β1-inducedfibroblasttomyfibroblastdiffe