repsox诱导牛成纤维细胞向脂肪细胞分化的研究

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1、分类号S823.9学校代码10129UDC636学号2009201099RepSox诱导牛成纤维细胞向脂肪细胞分化的研究RepSoxInducedBovineFibroblastCellsToAdipocyteDifferentiation申请人：李亚男学科门类：农学学科专业：临床兽医学研究方向：兽医产科学指导教师：刘俊平副教授李向臣副研究员论文提交日期：二〇一二年五月摘要已有研究证明，小分子化合物RepSox可上调mESCs的BMP-3水平，促进高效重编程。BMP-2、BMP-4具有诱导C3H10T1/2细胞向前脂肪细胞定向，经诱导可分化为成熟

2、脂肪细胞的能力。本研究将成纤维细胞定向分化为脂肪细胞，可为脂肪组织工程种子细胞的获得和研究，提供重要的实验参考。实验应用显微观察、分子生物学技术、流式细胞检测技术、免疫组织化学等手段，分析定向分化过程中BMP通路启动情况，细胞处理前后的周期及凋亡现象，增殖能力和细胞微丝骨架的变化情况，并首次从组蛋白修饰的角度研究细胞向前脂肪细胞定向的过程。实验结果：（1）15μMRepSox处理荷斯坦牛成纤维细胞3d，BMP2、Smad1、Smad2、Smad4表达量相对最高，微丝骨架结构调整，逐渐以长线状平行排列，可作为处理细胞条件；（2）处理组与对照组相比，

3、细胞周期G0/G1期比例减少，S+G2/M期比例增加；染色体核型及细胞增殖能力正常；细胞H3S10磷酸化水平上升了95.6%、S28减弱了26.3%、H3K9甲基化水平上升了74.7%、H3K27甲基化水平下降了47.4%、H3K9乙酰化水平减弱了64.8%；（3）RepSox处理3d的细胞，更换含10%FBS+0.5mMIBMX+10μg/ml胰岛素+1.0μM地塞米松+200μM吲哚美辛的标准培养液诱导14天，成功向脂肪细胞定向分化，BMP2、Smad1、Smad2、Smad4基因开始沉默。成脂诱导2d时表达422/aP2基因，细胞数量增加至

4、RepSox处理2d时的2.79倍。RepSox通过激活BMP通路上游受体BMPR1A、BMPR1B，下游信号分子P-Smad3、ID1等启动整个通路的活性。结论：RepSox具有启动BMP通路，促进成纤维细胞向前脂肪细胞定向，经标准诱导分化为成熟脂肪细胞的能力。关键词：RepSox；成脂分化；成纤维细胞；重编程RepSoxInducedbovinefibroblastcellstoadipocytedifferentiationAbstractExistingstudieshavedemonstratedthatsmallmolecularco

5、mpoundRepSoxraisestheBMP-3levelofmESCs,andpromotesefficientreprogramming.BMP-2andBMP-4possessthecapacityofinduceC3H10T1/2cellsdirectionallytowardspreadipocyteswhichcandifferentiateintomatureadipocytesthroughappropriateinduction.Inthisstudy,fibroblastsweretransdifferentiateddi

6、rectionallyintoadipocytes,aimingtoprovideexperimentalreferencesforthestudyonseedingcellsintheadiposetissueengineering.Microscopicobservations,molecularbiologicaltechniques,flowcytometry,immunofluorescencewereadoptedtoanalyzetheactivationofBMPpathway,thechangesincellcycleandap

7、optosis,thedynamicsofcellproliferationandmicrofilamentcytoskeletonintheprocessofdifferentiation,andforthefirsttimethedirectedinductionprocesstopreadipocyteswasunderstandedfromtheviewpointofhistonemodifications.Results:(1)Thetreatmentof15μMRepSoxonHolsteincattlefibroblastsfor3

8、dgottherelativelyhighestexpressionofBMP2,Smad1,Smad2,Smad4,andwithth