体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞向子宫韧带成纤维细胞分化的研究

《体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞向子宫韧带成纤维细胞分化的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、博士学位论文体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞向子宫韧带成纤维细胞分化的研究作者姓名：赵冰导师姓名：张曦教授崔世红教授学科门类：医学专业名称：妇产科学完成时间：2012年3月AthesissubmittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofdoctorAResearchontheIn-VitroInductionofRatBoneMarrowMesenchymalStemCellsintoUterineLligamentsFibroblastsBy:BingZhaoSupervisor:Prof.Xi

2、Zhang;Prof.ShihongCuiGynecologyandObstetricsTheThirdAffiliatedHospitalofZhengZhouUniversityMarch2012摘耍体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞向子宫韧带成纤维细胞分化的研究研究生：赵冰导师：张曦教授崔世红教授专业：妇产科学郑州大学第三临床学院河南郑州450052摘要研究背景人体盆底组织主要起承载人体盆腔各脏器的作用，女性盆底组织主要包括封闭骨盆出口的多层肌肉、筋膜及子宫韧带。这些组织因各种原因（如：妊娠、分娩、便秘、长期咳嗽等）发生损伤或撕裂

3、而使其支持功能减弱时，即发生子宫及相邻的直肠、膀胱、阴道壁发生移位及功能障碍，临床上称之为盆底功能障碍疾病（pelvicfloordysunction,PFD)，主要指压力性尿失禁(stressurinaryincontinence,SUI)和盆腔脏器脱垂（pelvicorgenprolapse,POP)。目前治疗方法主要包括手术治疗和保守性的药物治疗及盆底肌肉锻炼等康复治疗，但这些治疗均有其不足之处。特别是韧带组织，损伤后其修复过程形成瘢痕组织，不是真正意义上的再生，同时对盆底起最主要支持力量的子宫宫骶韧带-主韧带复合体的结构功

4、能又与PFD的发生、发展密切相关。因此，如何使损伤后的子宫韧带恢复其正常的结构和功能，是真IH治疗该疾病急需解决的问题。组织工程学的诞生，为子宫韧带的修复提供了新的手段。最近的研究表明：在修复过程中，受损韧带局部出现来源于骨髓间充质的干细胞，其性状与周围的韧带成纤维细胞非常相似。在受损膝腱、髌韧带中注射入含骨髓问充质干细胞或成纤维细胞的纤连蛋白基质可影响其组织学形态、超微结构和必需的细胞外基质蛋白mRNA的表达，使受损膝腱、韧带更容易恢复。另外发现，骨髓间I摘耍充质干细胞与肌腱或韧带成纤维细胞共培养后可提高兔肌腱、韧带相关基因的表

5、达。骨髓间充质干细胞(bonemarrowmesenchymalstemcells,BMSCs)是一种具有自我复制和多向分化潜能的原始细胞，在体内、外均可定向诱导分化为具有各种表型的子代细胞。本研究旨在研究体外正常细胞及机械牵张损伤细胞在共培养体系中定向诱导BMSCs分化为子宫韧带成纤维细胞的影响。实验中用机械牵张刺激损伤体外培养的大鼠子宫韧带成纤维细胞，造成PFD的细胞损伤模型，将BMSCs与.TH常子宫韧带成纤维细胞和机械牵张损伤的子宫韧带成纤维细胞在体外间接共培养（非接触式）。同时，检测共培养诱导后BMSCs弹性蛋白、赖氨酰

6、氧化酶(lysyloxidase,LOX)、Fibulin-5的表达情况，以进一歩认i只BMSCs的分化潜能及生物学特性。本文研究了在体外通过非接触式共培养诱导BMSCs向子宫韧带成纤维细胞的分化，为从组织工程学角度以根源上治疗PFD疾病提供可能的研究思路及新的治疗手段。研究方法1.大鼠BMSCs的体外分离培养：采用密度梯度离心法结合传代贴壁筛选法分离纯化获得大鼠BMSCs;通过形态学观察、细胞生长曲线绘制、细胞表面特异抗原及细胞周期的流式细胞学检测，对体外培养获得的BMSCs进行初歩鉴定；采用体外诱导大鼠BMSCs向成骨细胞和

7、成脂细胞的分化，对获得的BMSCs的生物学功能进行鉴定。2.大鼠子宫韧带成纤维细胞的体外分离培养及鉴定：采用大鼠子宫韧带组织块酶消化法，进行子宫韧带成纤维细胞的原代培养，通过形态学观察、细胞生长曲线的绘制及免疫组化测定其胶原i、m蛋白的表达对获得的子宫轫带成纤维细胞迸行鉴定。3.对大鼠子宫韧带成纤维细胞进行体外机械牵张，建立机械牵张损伤模型：根据韧带成纤维细胞的生物学特性，在细胞牵张仪上采用负载10%应力，1赫兹的机械牵张刺激大鼠子宫韧带成纤维细胞3h、6h、12h、24h,36h不同时间段后，通过透射电镜、鬼笔环肽染色观察不

8、同吋问牵张损伤后成纤维细胞的超微结构和细胞骨架的变化情况；采用实时定量RT-PCR技术测定不同吋问牵张损伤后成纤维细胞1型胶原和III型胶原的合成能力；用台盼蓝染色观察细胞的凋II摘耍亡情况。4.大鼠BMSCs与大鼠子宫韧带成纤维细胞共培养体系