大鼠骨髓间充质干细胞向心肌样细胞的体外诱导分化研究

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1、第四军医大学硕士学位论文大鼠骨髓间充质干细胞向心肌样细胞的体外诱导分化研究姓名：高峰申请学位级别：硕士专业：外科学（心血管外科学）指导教师：蔡振杰2003.5.1独创。狴声明莱承学校严谨的学风与伉良的科学道德，本人声明所呈交的论文是我个人在导褥搓等下遗褥翦蘸究王撵瑗嚣耩蘸霸究骥莱。鬈冀戆麓，豫了交率祷鬻絮以标注和致谢的地隽外，论文中不包含其地八已经发表藏撰写过魈砩究成果，不包禽本人藏他^己申请学位或其他弼途使用过酌成果。与我一同I作的同志辩奉赣究礁搬蕤{薹舞贡献瘸琶豢论文攀l睾了麓臻蘸谱弱舞表示了致谢。申请学键论文与资料嚣育不宾之处，本人承担一切梗关责任。褥交

2、捧砉菱蓍：强嚣耀保护知识产权声明a_咚，≤、每l本人完全了解第四军医大学育关保护知识产权鹩规定，娜：讲究。生在枝攻谈学谴期溺论文I释蔚稚谈产较犟位麓第西军医大学。本^谦证华鼗离较茜，发表论文蓑爱惩论文I佟鹱累嚣警签摹缱爨然淹纂毽攀嚣大学。学较鸯较璨瓣送交论文的复印件，允许论文被查阍和措闻；学较可以公布论文韵全罐或部分谭容(探密内容豫羚)，可议累焉辩球、缩耀或懿糟复制手段谦存论文。论交撂妻签器：～囊逸霹舞签羲嚣弱：避璺}第四军医大学硕士学位论文英文缩写MSCsrMSCsESHSCsCFU，F5．AzaDMEMFBSPBScTnIcTnTPAGESDS1HsRPA

3、P缩略词表英文全名mesenchymalstemcellsratmesenchymalstemcellsembryonicstemcellshematopoieticstemcellscolonyformingunitsfibroblastic5-azacytidineDulbeccoEagle’sminimumessentialmediumfetalbeefSel'UlTlphosphatebufferedsalinecardiactroponinIcardiactroponinTpolyacrylamidegelelectrophresissodiumdo

4、decylsulfateN—trisaminomethanerestpotentialactionpotential中文全名骨髓间充质干细胞／间充质干细胞大鼠骨髓间充质干细胞胚胎干细胞造血千细胞成纤维细胞样集落形成单位5一氮胞苷改良Eagles培养液胎牛血清磷酸盐缓冲液心肌肌钙蛋白I心肌肌钙蛋白T聚丙烯酰胺凝胶电泳十二烷基硫酸钠N一三氨基甲烷静息电位动作电位第四军匿太学硕懒学位论文中文摘要大鼠骨髓间充质干细胞向心肌样细胞的体外诱导分化研究研兜生毫峰导师蘖振杰教授e成体心肌细胞的再生悬医学界急待解决的难题之一，而临床上心脏痣癃入足乎都转套不强程度豹心瓢缨黪的攒害

5、，冀憩导致心麓秘熊麴进一步恶化。骨髓间充质干细胞(mesenchymalstemcells，MSCs)所具有的多熊分讫黪链为心虢缓熬嚣楚鹣酝究提供了凝熬方爨魏愚躐。4本研究拟通过体外分离、培养大鼠骨髓间充威干细胞(ratmesenchy．malstemcells，rMSCs)，麓寨其娥魏学掩经；霹培养懿rMSCs纷体补药物诱导，促其向心肌样细胞分化并予以臻定，探讨体外药物诱导分化兹条{孛、瓣箨秘特点。方法：percoll液密度梯度分离rMSCs体外培养，观察其生物学特性：震不嗣浓霞5一氮慈棼(5．azacytidine，5-Aza)瓣其送行诱导24h缓嚣继续培

6、养4w，利用免疫细胞化学、透射电镜、westernblot等技术对诱导后rMSCs懿心霆蓬缓藏榉分诧遴行鏊定，并尝试运蕉溪冀镨技术溅定蘩静急电位(restpotential，RP)和动作电位(actionpotential，AP)，对其电生理俸&窃步探讨。(结果：percoll液密度梯发分离的rMSCs纯度较高，在体外培养时细藤麓一佳较鲟；5一lOpmol／L5-Aza为诱导rMSCs游心腻祥缩臃分亿较为合适的浓度；免疫细胞化学染色可见a，actin，cardiactroponinI(eTnI)阳瞧维臆，透射电镜观察到部分缨脆形成瓤丝样缭梅，缁胞中可藏弱丰富的

7、线粒体和糖原颗粒；westernblot显示心肌特算性结构蛋白cTnI在2第四军医大学硕士学位论文诱导后的rMSCs中有表达。部分细胞有着与大鼠心室肌细胞接近的RP，但未能诱发出AP。又结论：l、percoll液密度梯度离心法是一种简便、有效分离MSCs的方法；2、5．10umol／L5-Aza为诱导rMSCs向心肌样细胞分化较为合适的浓度；3、MSCs具有多能分化特性，体外培养的rMSCs可在5-Aza诱导下向具有心肌细胞结构特点的心肌样细胞分化。关键词：骨髓间充质干细胞；5一氮胞苷；免疫印迹：膜片钳；心肌／细胞散细胞分化f药物作用电生理“第四军医大学硕士学

8、位馀文ABSTRACTratmesea