诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化的实验研究

《诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化的实验研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化的实验研究作者：郭茂娟姜希娟马东明范英昌【摘要】目的观察乳鼠心肌细胞条件培养液、SalB、5氮胞苷（5aza）及SalB联合5aza体外诱导骨髓间充质干细胞(MSCs)分化为心肌样细胞的作用及其机制。方法分离培养及鉴定大鼠MSCs，培养乳鼠心肌细胞，收集条件培养液对其进行分组诱导：①SalB(终浓度为250μg/L)，②5aza组(终浓度为10μg/L)，③SalB联合5aza组(终浓度分别为250μg/L与10μmol/L)，④乳鼠心肌细胞条件培养液，

2、⑤未加诱导剂的阴性对照组。选取MSCs进行诱导，诱导周期为4RNA的相对表达量。结果细胞形态学显示，诱导后的MSCs体积增大，增殖减慢，并出现肌管样结构；免疫细胞化学结果显示，诱导后的MSCs表达心肌特异性蛋白cTnT，与5aza组相比，SalB组和条件培养液两组蛋白表达较低，SalB联合5aza组蛋白表达升高；实时荧光定量RTPCR结果显示除阴性对照组外，其他四组表达心肌分化早期基因，SalB联合5aza组诱导后的MSCs的心肌早期分化基因表达明显高于其他三组。结论SalB联合5aza诱

3、导MSCs表达心肌特异性肌钙蛋白cTnT；上调心肌早期基因NKX2.5、GATA4mRNA的表达,证实其能够向心肌细胞分化能力；条件培养液不能上调心肌细胞的早期基因和蛋白，不能诱导其分化。【关键词】骨髓间充质干细胞；诱导分化；丹酚酸B；5氮胞苷　　【Abstract】ObjectiveToexploretheroleandmechanismofbonemarroesenchymalstemcells(MSCs)differentiatedintomyocardialcellsinducedbyn

4、eonatalratmyocardialcellsconditionedmedium,salvianolicacidB(SalB),andSalBbinedyocardialcellsinalconcentration250μg/L),5azacytidine(5aza)(250μg/L),SalBbinedol/L),Neonatalratmyocardialcellsconditionculturefluid,andorphologicchangeicroscope,cTnTexpressi

5、onmnocytohistochemicalassay,andmyocardialearlygeneNKX2.5,andGATA4mRNAexpressionorphologicobservation:afterinducing,MSCsvolumeenlarged,proliferationspeedsloyotube.②ExpressionofcTnT:cTnTyocardialearlygene:myocardialearlygeneeasuredinother4groupsexceptne

6、gativecontrolgroup,andyocardialspecifictroponin(cTnT),upregulateearlygeneNKX2.5andGATA4mRNA,MSCscandifferentiateintomyocardialcellsandconditionculturefluidcan′tupregulatetheexpressionsofmyocardialearlygeneandprotEin,andinduceMSCsdifferentiation.　　【Key

7、esenchymalstemcells;Inducedanddifferentiated;SalvianolicacidB;5azacytidine　　骨髓间充质干细胞(MSCs)系自体来源,取材容易,扩增能力强,是一种体内外均有极强的分化潜能的干细胞〔1〕。SCs体外可被5aza诱导分化为心肌样细胞。但5氮胞苷(5aza)作为抗肿瘤药物具有一定的毒副作用，故寻找安全、有效的诱导剂应是目前的重要课题。以往的研究结果表明SalB可以减小心肌梗死的面积〔3〕，并能有效地促进梗死灶内成纤维细胞的增

8、生，加速心脏的修复过程。本研究运用乳鼠心肌细胞条件培养液、SalB、5aza以及SalB联合5aza体外诱导，分别从诱导后细胞的形态学、心肌特异性蛋白cTnT表达及心脏早期分化基因NKx2.5、GATA4mRNA表达方面进行比较。　　1材料与方法　　1.1动物清洁级，odelTC2323CO2细胞培养箱,微量移液器(法国Gilson)；ELEM低糖培养基,胰蛋白酶(美国GiBco公司)；优级胎牛血清(美国Hyclone公司)；双抗,EDTA(美国Sigma公司)