诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化的实验研究论文

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1、诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化的实验研究论文郭茂娟姜希娟马东明范英昌【摘要】目的观察乳鼠心肌细胞条件培养液、SalB、5氮胞苷（5aza）及SalB联合5aza体外诱导骨髓间充质干细胞(MSCs)分化为心肌样细胞的作用及其机制。方法分离培养及鉴定大鼠MSCs，培养乳鼠心肌细胞，收集条件培养液对其进行分组诱导：①SalB(终浓度为250μg/L)，②5aza组(终浓度为10μg/L)，③SalB联合5aza组(终浓度分别为250μg/L与10μmol/L)，④乳鼠心肌细胞条件培养液，⑤未加诱导剂的阴性对照组。选取MSCs进行诱导，诱导周期为4RNA的相对表达量。结果细胞形态学显示

2、，诱导后的MSCs体积增大，增殖减慢，并出现肌管样结构；免疫细胞化学结果显示，诱导后的MSCs表达心肌特异性蛋白cTnT，与5aza组相比，SalB组和条件培养液两组蛋白表达较低，SalB联合5aza组蛋白表达升高；实时荧光定量RTPCR结果显示除阴性对照组外，其他四组表达心肌分化早期基因，SalB联合5aza组诱导后的MSCs的心肌早期分化基因表达明显高于其他三组。结论SalB联合5aza诱导MSCs表达心肌特异性肌钙蛋白cTnT；上调心肌早期基因NKX2.5、GATA4mRNA的表达,证实其能够向心肌细胞分化能力；条件培养液不能上调心肌细胞的早期基因和蛋白，不能诱导其分化。【关

3、键词】骨髓间充质干细胞；诱导分化；丹酚酸B；5氮胞苷【Abstract】ObjectiveToexploretheroleandmechanismofbonemarroesenchymalstemcells(MSCs)differentiatedintomyocardialcellsinducedbyneonatalratmyocardialcellsconditionedmedium,salvianolicacidB(SalB),andSalBbinedyocardialcellsinalconcentration250μg/L),5azacytidine(5aza)(250μg/L)

4、,SalBbinedol/L),Neonatalratmyocardialcellsconditionculturefluid,andorphologicchangeicroscope,cTnTexpressionmnocytohistochemicalassay,andmyocardialearlygeneNKX2.5,andGATA4mRNAexpressionorphologicobservation:afterinducing,.freeleenlarged,proliferationspeedsloyotube.②ExpressionofcTnT:cTnTyocardialearl

5、ygene:myocardialearlygeneeasuredinother4groupsexceptnegativecontrolgroup,andyocardialspecifictroponin(cTnT),upregulateearlygeneNKX2.5andGATA4mRNA,MSCscandifferentiateintomyocardialcellsandconditionculturefluidcan′tupregulatetheexpressionsofmyocardialearlygeneandprotein,andinduceMSCsdifferentiation.

6、【Keyesenchymalstemcells;Inducedanddifferentiated;SalvianolicacidB;5azacytidine骨髓间充质干细胞(MSCs)系自体来源,取材容易,扩增能力强,是一种体内外均有极强的分化潜能的干细胞〔1〕。SCs体外可被5aza诱导分化为心肌样细胞。但5氮胞苷(5aza)作为抗肿瘤药物具有一定的毒副作用，故寻找安全、有效的诱导剂应是目前的重要课题。以往的研究结果表明SalB可以减小心肌梗死的面积〔3〕，并能有效地促进梗死灶内成纤维细胞的增生，加速心脏的修复过程。本研究运用乳鼠心肌细胞条件培养液、SalB、5aza以及SalB联

7、合5aza体外诱导，分别从诱导后细胞的形态学、心肌特异性蛋白cTnT表达及心脏早期分化基因NKx2.5、GATA4mRNA表达方面进行比较。1材料与方法1.1动物清洁级，odelTC2323CO2细胞培养箱,微量移液器(法国Gilson)；ELEM低糖培养基,胰蛋白酶(美国GiBco公司)；优级胎牛血清(美国Hyclone公司)；双抗,EDTA(美国Sigma公司)；小鼠抗大鼠单克隆抗体Tro