鳖源胶原蛋白分离纯化及生物学性能的研究

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1、浙江万里学院硕士专业学位论文题目：鳖源胶原蛋白分离纯化及生物学性能的研究Title：Isolation,PurificationandBiologicalPropertiesofCollagenfromSoft-ShelledTurtleCalipash研究生姓名：杨桠楠校内导师：李彩燕、钱国英校外导师：张海琪专业学位类别：工程硕士专业学位领域：生物工程所在学院：生物与环境学院论文提交日期2015年12月31日题名页中图分类号：Q819单位代码：10876学号：2013881008密级：浙江万里学院硕士专业学位论文题目：鳖源胶原蛋白分离纯化及生物学性能的研究Title

2、：Isolation,PurificationandBiologicalPropertiesofcollagenfromSoft-ShelledTurtleCalipash研究生姓名：杨桠楠校内导师：李彩燕校外导师：张海琪专业学位类别：工程硕士专业学位领域：生物工程所在学院：生物与环境学院论文提交日期2015年12月31日鳖源胶原蛋白分离纯化及生物学性能的研究论文作者签名:指导教师签名:答辩委员会主席：单位：宁波大学姓名：王国良职称：教授委员1：单位：海通食品集团股份有限公司姓名：孙金才职称：教授级高工委员2：单位：浙江万里学院姓名：吴月燕职称：教授委员3：单位：浙江

3、万里学院姓名：戚向阳职称：教授委员4：单位：浙江万里学院姓名：包永波职称：副研究员答辩日期：2015年12月24日浙江万里学院硕士专业学位研究生学位论文摘要摘要近年来，胶原蛋白因其良好的生物相容性在生物医药材料的应用中得到广泛的关注，中华鳖作为我国传统营养滋补佳品，其裙边中含有丰富的胶原蛋白，不仅可以作为水产胶原蛋白的良好来源，还能为中华鳖深加工利用提供研究方向。本论文旨在基于对中华鳖裙边基本成分及胶原纤维组织形态的分析，对中华鳖裙边胶原蛋白纯化工艺进行研究，并对获得的纯品表征理化性质和研究生物学性能，为中华鳖深加工高值化利用和鳖源胶原蛋白在生物材料中的应用提供一定的

4、理论基础。本研究结果如下：（1）裙边基本营养成分及胶原纤维组织结构的研究。测定发现中华鳖裙边中氨基酸种类齐全，羟脯氨酸含量高达8.22%；水分为74.90%，总蛋白、脂肪及灰分含量分别为78.20%、1.27%及9.90%；羟脯氨酸法测定中华鳖裙边胶原蛋白为71.20%，约占总蛋白的95%；VanGieson染色法观察发现裙边胶原纤维含量非常高；苦味酸-天狼星红染色法观察发现裙边中胶原纤维类型主要是I型。（2）裙边胶原蛋白纯化工艺的研究。在实验室建立的裙边胶原蛋白最优提取条件基础上，以胶原蛋白回收率为指标，采用L49（3）正交设计试验优化了影响裙边胶原蛋白粗提液的盐析

5、因素（盐析时间、NaCl浓度、NaCl浓度），得到最佳盐析条件：盐析时间为24h，NaCl浓度2mol/L，胶原蛋白浓度为8g/L，胶原蛋白回收率是80.47%，SDS-PAGE证明盐析能使胶原蛋白得到有效的纯化；并且采用不同截留分子量透析袋（25KD、50KD、100KD）对胶原蛋白粗提液分别进行直接透析24h、48h，SDS-PAGE检验纯化效果发现截留分子量为100KD的透析袋在透析48h后的纯化效果最好，达到了100%纯化。（3）裙边胶原蛋白理化性质的鉴定。以裙边胶原蛋白纯品（STCC）为研究对象，并和马面鱼皮胶原蛋白（HSC）、牛皮胶原蛋白（BSC）的部分理

6、化性质进行比较。SDS-PAGE证明STCC组成形式为[α1(I)]2α2(I)，分子量约为350KD，是典型的I型胶原蛋白；紫外图谱显示STCC特征吸收峰在230nm附近，符合I型胶原蛋白的特征；红外光谱显示STCC特征吸收峰和HSC、BSC基本吻合，说明胶原蛋白在提取和纯化后保留了较为完整的三股螺旋结构，并且不存在物种差异；氨基酸分析发现，STCC中Gly含量最高，约占氨基酸总I浙江万里学院硕士专业学位研究生学位论文摘要量的1/3，亚氨基酸（Pro、Hyp）总量高达23%；溶解性实验表明STCC等电点（pI）为6，在NaCl浓度为6%（W/V）时溶解度达到最低点；

7、STCC热变性温度（Td）和熔化温度（Tm）分别为35.1℃和105.14℃，熔化温度（Tm）和HSC的Tm（105.05℃）相近，二者均低于BSC的Tm（110.24℃）；扫描电镜图像显示STCC冻干品呈疏松多孔的纤维结构，且孔径均匀。以上结果表明STCC具有良好的水产胶原蛋白特性，可以为其加工开发利用提供一定的理论基础。（4）裙边胶原蛋白生物学性能的研究。分别通过直接水浸法和体外胶原蛋白酶降解法对STCC的吸水性和体外降解性进行了考察，发现STCC吸水力高达12.06g/g，持水力几乎达到100%，且在体外具有可降解性；以SD大鼠为动物模型，对S