重组人源胶原蛋白ⅲ组织工程支架的制备及性能研究

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1、硕士学位论文重组人源胶原蛋白Ⅲ组织工程支架的制备及性能研究作者：唐启伟指导教师：樊燕蓉副教授杨树林教授南京理工大学2014年3月MasterDissertationIIIIIIlllllllllllIIIllLIIIlllllllIllIIIY2521814PreparationandpropertiesstudyofrecombinanthumancollagenlIItissueengineeringscaffoldByTtQiweilangQiweiSupervisedbyPr吐FanYanrong场鳄Sh

2、ulinNanjingUniversityofScience&TechnologyMarch，2014声明本学位论文是我在导师的指导下取得的研究成果，尽我所知，在本学位论文中，除-；jJn以标注和致谢的部分外，不包含其他人已经发表或公布过的研究成果，也不包含我为获得任何教育机构的学位或学历而使用过的材料。与我一同工作的同事对本学位论文做出的贡献均已在论文中作了明确的说明。研究生签名：，霪壶鲑洲年弓月妇学位论文使用授权声明南京理工大学有权保存本学位论文的电子和纸质文档，可以借阅或上网公布本学位论文的部分或全部内容，

3、可以向有关部门或机构送交并授权其保存、借阅或上网公布本学位论文的部分或全部内容。对于保密论文，按保密的有关规定和程序处理。研究生签名：重复!堑矽渺年乡月哲日硕士论文重组人源胶原蛋III组织工程支架的制各及性能研究摘要胶原蛋白由于其良好的生物学特性已成为组织工程常用的载体材料。本研究所用重组人源胶原蛋白是通过基因工程法设计胶原蛋白基因序列，而后进行翻译所生产的具有人胶原蛋白特征的蛋白质，与从动物体提取的胶原蛋白相比，具有亲水性、无病毒隐患的优点，且易于产业化生产，在组织工程支架材料的研究中有良好的应用前景。但是单一

4、成分作为生物支架时都不能满足支架的要求，本文利用重组人源胶原蛋EtIII与壳聚糖复合，采用戊二醛交联的方法来制备重组人源胶原蛋t兰tIII／壳聚糖三维海绵支架，并对支架理化性质及细胞相容性进行初步研究。其相关研究结果如下。1．本文首先利用构建的毕赤酵母基因工程菌通过高密度发酵生产重组人源胶原蛋白(ImSC)，采用SDS．PAGE、质谱、氨基酸组分分析及红外光谱等方法对目的蛋白进行分析，发现RHSC是一种胞外分泌型产物，其单体分子量约56kD，二聚体分子量为单体的二倍，一级结构与所设计目的基因相符合，并与Sigma

5、llI型胶原蛋白具有相似的结构特征。2．探究重组人源胶原蛋EtIII／壳聚糖支架的制备工艺。将重组人源胶原蛋白III和壳聚糖按质量比5：1，3：1，l：1，1：3，1：5混合，利用戊二醛进行交联，通过真空冷冻干燥法制备复合多孑L支架。考察了支架的形貌特征、孔径大小、孔隙率、吸水率、降解率、热稳定性等理化性质。结果显示，制备的支架孔径在20．50pm，孔隙率都在93％以上，壳聚糖的加入显著改善了支架的降解性能。综合各项理化性能结果，按照1：1配比制备的支架孔径分布均匀，支架内部孔隙交联度高，吸水率和降解率较为合适，

6、热分解温度达到249．29℃，符合生物材料的基本要求。3．利用不同浓度戊二醛交联制备支架，发现用0．05％的戊二醛进行交联制备的支架呈均匀分布的多孔结构，孔隙丰富，且交联度高，在生理盐水中稳定较好。考虑选用终浓度为0．05％的戊二醛作为交联剂，来制备壳聚糖／重组胶原复合支架。4．将重组人源胶原蛋白III和壳聚糖按1：1的配比，0．05％的戊二醛交联并制备其支架浸提液，通过AO／EB染色，MTT实验，初步探讨了其对人皮肤成纤维细胞的生物相容性。结果发现其支架浸提液细胞毒性小，基本不影响细胞的生长活性，从侧面反映了支

7、架具有良好的细胞相容性，有望应用于皮肤组织工程。关键词：重组人源胶原蛋白III壳聚糖高密度发酵真空冷冻干燥人皮肤成纤维细胞细胞相容性硕士论文重组人源胶原蛋白ⅡI组织工程支架的制备及性能研究AbstractCollagenhasbecomeconventionalcarriermaterialfortissueengineeringduetoitsgoodbiologicalproperties．TherecombinanthumancollagenusedinthisstudyWaspro—ducedbygene

8、ticengineeringmethodtodesignthecollagenproteingenesequences，andthenhasthecharacteristicsofhumancollagenproteinthroughtranslationprocess．Comparedwiththecollagenfromanimalbody,therecombinan