利用重组人源胶原蛋白制备生物医学组织工程材料

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1、硕士学位论文利用重组人源胶原蛋白制备生物医学组织工程材料作者：周爱梅指导教师：杨树林教授南京理工大学2015年3月MasterDegreeDissertationFabricationofRecombinantHuman．sourceCollagenScafl’0ldsforBiomedicalTissueEngineering爿砌“Z乃D跖以Z胁优么忍口跖Stlpen琏sedbyP，pfShntinlangNanjingUniVersityofScience&TechnologyMarch，2015声明本学位论文是我在导师的指导下取得的研究成果，尽我所知，在本学位论文中，除了加以标注和致

2、谢的部分外，不包含其他人已经发表或公布过的研究成果，也不包含我为获得任何教育机构的学位或学历而使用过的材料。与我一同工作的同事对本学位论文做出的贡献均己在论文中作了明确的说明。研究生签名：学位论文使用授权声明南京理工大学有权保存本学位论文的电子和纸质文档，可以借阅或上网公布本学位论文的部分或全部内容，可以向有关部门或机构送交并授权其保存、借阅或上网公布本学位论文的部分或全部内容。对于保密论文，按保密的有关规定和程序处理。研究生签名：硕士学位论文利用重组入源胶原蛋白制备生物医学组织工程材料摘要本论文以基因工程菌A幽砌p口s胁加高密度发酵获得的重组人源胶原蛋白(ReconlbillantHum

3、all-sourceCollageIl，ImSC)为主要研究对象，对其进行分离纯化和结构表征，并与壳聚糖复合，通过冷冻干燥技术制备三维多孔状海绵支架。选择具有强抗氧化活性的原花青素(Proanthocyallidins，PA)作为交联剂，以期提高支架的各方面特性。1．通过分离纯化获得的RHSC达到电泳纯，测试显示：纯度>99％，回收率>93％。采用Dsc，紫外光谱，红外光谱和NMR对RHSC进行结构表征，并与标准IⅡ型胶原蛋白比对，确定RHsc具有III型胶原蛋白的特征结构。2．通过改变壳聚糖．重组人源胶原蛋白海绵基质制备过程中的因素发现，醋酸的浓度和壳聚糖与RHsc的质量比是影响微观结构

4、形成的关键因素。通过PA交联作用制备的海绵成品具有良好的理化性质，其内部孔径约为110一160um，孔隙率>92％，吸水率约为3900％；红外光谱测试发现，PA与海绵基质可以形成稳定的氢键；DSC和TG分析显示：通过交联作用，海绵的热稳定性提高；体外酶解实验表明，交联后海绵的抗酶解能力增强。对海绵进行生物相容性研究，内容包括细胞的黏附、迁移、增殖和细胞形态等方面，结果显示：海绵支架具有较好的细胞相容性。PA交联的壳聚糖一重组人源胶原蛋白海绵是一种理化性质良好的生物材料，对细胞的黏附、生长和增殖都有一定的促进作用，尽管目前还处于实验研究阶段，但有望进一步应用于组织工程化器官的研究以及临床的应

5、用。关键词：重组人源胶原蛋白，壳聚糖，原花青素，组织工程，生物相容性Abstract硕士学位论文AbstractRecombinaIlthuman—sourceCollageIl(RHSC)waschoosenasthemainobjectobtainedtllrou曲hi曲-densityfbnnentalionofgeneticen百neeringbacteriaPf幽缸p邪幻，fs．Firstly，s印arateda11dp嘶fiedRHSC龀ImsuspeIlsionandcharact嘶zeditssructuI．e．Then，combineditwithc11itosallto

6、preparethree-dimensionalporousspongesusingf诧eze-dr姐ngtecllniques．Thestrongantioxidalltofproalltllocyanidins(PA)wasselectedascross一1inkingagenttoimproVemepropeniesofsponges．1．ThepurityofI己HSCreachedelectrophoresisde掣eeaRers印arationandpuri矗cation，andcharacterizationindicatedthatthep们fywasaboVe99％，、Ⅳ

7、hiletherecover)，eXceeded93％．DSC，UVFT-IRaJldNMRweredetectedtocompareRHSCwimtypeIIIcollagen．ReSultsshowedthatRHSChasthecharacteristicstmctureoftypeIⅡcollagen．2．WeeValuatedseveralfactorsduringspongesf孙ricationandfou