鱼鳞胶原蛋白的制备方法研究

《鱼鳞胶原蛋白的制备方法研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、2010年8月湖北第二师范学院学报Aug．2010第27卷第8期JournalofHubeiUniversityofEducationV01．27No．8鱼鳍胶原蛋白硇制备方法研究宁华，刘学旺(湖北第二师范学院化学与生命科学学院，武汉430205)摘要：胶原蛋白是生物体内含量极高的一种蛋白质，本文采用水提取法和碱提取法提取草鱼鱼鳞胶原蛋白，通过不断地改变实验提取条件的对比观察，并通过聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)来对提取的胶原蛋白进行鉴定，进而探究草鱼鱼鳞胶原蛋白提取的较佳条件：EDTA的提取浓度为0．18mol／L，提取用量(3

2、0rod、提取时间(12h)以及提取转数(8000r／Ⅲ．m)、提取温度(70℃)。关键词：草鱼(Ctenopharyngodonidellus)；鱼鳞胶原蛋白；脱钙；提取；电泳中图分类号：Q51文献标识码：A文章编号：1674~44X(2010)8--0027-04作者筒介：宁华(1957一)，女，湖北武汉人，副教授，研究方向为生物学。蛋白(Collagen)又称胶原，是由三条肽链拧成的烘烤箱、PH计、圆盘电泳仪槽、玻璃管、微量移液器、移螺旋形纤维状蛋白质，丝状的胶原蛋白纤维，能使皮肤液枪枪头、烧杯、量筒、离心管、电冰箱、注射器

3、、酸式滴保持结实而有弹性。它存在于人体皮肤、骨骼、牙齿、定管、滴管、容量瓶、锥形瓶、抽气机、滤纸、漏斗。肌腱等部位，主要生理机能是粘合结缔组织。胶原具实验试剂：盐酸(6mol／L，lmol／L)、氢氧化钠(1．有很强的生物活性和生物功能，能参与细胞的迁移、分2mol／L)、冰醋酸、丙烯酰胺(武汉贝特生物)、过硫酸化和增殖，使骨骼、肌腱、软骨和皮肤具有一定的机械铵(中国上海试剂有限公司)、亚甲基双丙烯酰胺、三强度。胶原因为其较弱的抗原性和良好的生物相容羟甲基氨基甲烷(简称Tris)、蔗糖(广州化学试剂性，在烧伤、创伤、眼角膜疾病、美

4、容、矫形、硬组织修厂)、四甲基乙二胺(TEMED，避光保存)、氨基黑10B、复、创面止血等医药卫生领域用途广泛。胶原蛋白在溴酚蓝、甘氨酸、考马斯亮蓝(1％)、甲醇(50％)、ED—食品方面应用主要有食品包装、肉制品添加剂、胶原小TA溶液、氯化钠。食品、保健食品等⋯。1．2方法最常见的胶原蛋白类型有I型、Ⅱ型、ⅡI型胶原，原料处理：将新鲜鱼鳞清洗干净后，将鱼鳞剪成小而鱼鳞胶主要为I型胶原【2]。目前主要是从猪、牛等碎片，放人烘烤箱干燥后放入保鲜袋中于冰箱(一陆生动物的皮和骨中提取，近年来由于疯牛病、口蹄疫l8℃)中保存。的流行，使得

5、从陆生动物的皮、骨中提取胶原蛋白的安EDTA脱钙：将鱼鳞放人0．18mol／LEDTA溶液中全性受到怀疑，世界各国都将其目光转向从水产品中(每克鱼鳞约需30mlEDTA溶液)。由于钙、镁、锌、铁提取胶原蛋白的研究j。以及铜、重金属离子不断与溶液中的EDTA发生络合我国淡水鱼产量丰富，据估计我国每年产生的鱼的性质，达到脱除鱼鳞中金属离子的目的。鳞约达5万吨，鱼鳞约占鱼体重的的1．5％一2．0％，脱除率计算公式：脱除率(％)=(鱼鳞原重一处而绝大多数作为生活垃圾或企业生产的下脚料丢弃，理后鱼鳞净重)／鱼鳞原重100％不仅浪费资源，还造

6、成环境污染]，因此从水生动物氯化钠脱除杂蛋白：将脱钙后的鱼鳞放人3％氯中提取安全、卫生、无害的胶原蛋白是目前研究的一项化钠(3g氯化钠溶于100ml水中)溶液中(每克鱼鳞需热门课题。本文选用水和碱提取法进行胶原蛋白的提5Oral氯化钠溶液)，脱杂24小时。取。通过对碱的用量、转速、温度和碱液浸泡时间的比鱼鳞胶原蛋白的提取：较来探究胶原蛋白的提取效果。(I)碱提取法：分别称取三份5克草鱼鱼鳞(标记1材料与方法为①、②、③)，EDTA溶液(8．044gEDTA溶于150ml1．1材料水中)脱钙时间和氯化钠溶液(25o~)除杂时间均相原

7、料：草鱼(Ctenopharyngodonidellus)鱼鳞(收集同，均放入1．2mol／L的NaOH溶液中浸泡5天后提取地点：江夏区湖口菜市场)收稿日期：2010—06—25实验器材。电子天平、电热恒温水浴锅、离心机、·27·溶液(溶液颜色都为金黄色)后，按照下面的碱提取步骤进行：A．探究离心转速对提取胶原蛋白的影响：①鱼鳞(5g)_+清洗_+1．2mol／LNaOH溶液溶解(2)水提取法：分别称取六份5克鱼鳞，EDTA溶(浸泡5天)_+离心(4000r／rain，20min)--+．L清液(8．044gEDTA溶于150ml

8、水中)脱钙时间和氯化液(45In1)mol／LHC1溶液(耗用9．8m1)滴钠溶液(250mi)除杂时间均相同，按照以下步骤进行定至pH=3时产生沉淀离心分离-÷回收沉水提取：淀(棕黑色)_+除盐_+电泳；A．对胶原蛋白提取温度的探究，其步骤如下图