重组类人胶原蛋白ⅱ组织工程支架材料的性能及生物相容性研究

《重组类人胶原蛋白ⅱ组织工程支架材料的性能及生物相容性研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、分类号：——密级；——西北大学硕士学位论文题目：重丝差厶篮盈量鱼里丝堡三猩童錾盐盘鲍：些丝丛生堑扫奎：睦盟窒指导教师：基垡竖专业技术职务：丝撞学科(专业)：丝生垫堂答辩日期：2007．6．学位授予日期：二00七年六月摘要随着组织工程的迅速发展，生物材料日益受到人们的关注。胶原蛋白做为一种天然生物材料，因其具有低抗原性、生物可降解性、优越的生物相容性并且还有利于细胞贴附和迁移的特点，被广泛应用于组织工程领域。重组类人胶原蛋白II(recombinanthuman-likecollagenⅡYa{LCII)是一种由人类胶原基因的mRNA反转录成eDNA重组入大肠杆菌经高密度发酵而成的蛋

2、白，与动物体提取的胶原蛋白相比，具有安全性高、无病毒隐患的优点，同时还具备大规模产业化生产的特点，有很好的应用前景。组织工程支架材料的构建是RHIcII应用于组织工程的前提，本文采用戊二醛交联的方法将RHLC11制作成膜状和海绵状组织工程支架材料，探讨不同浓度的戊二醛对RHLCII组织工程支架材料的性能和生物相容性的影响。1．采用终浓度为0．01％，0．025％，0．05％，0．075％，O．1％的戊二醛对RHLClI进行交联，利用自然干燥法制备RmcH膜。当戊二醛浓度在0．025％以上时，能制备出RHLCII膜。采用BHK-21细胞对RHLCII膜进行细胞毒性评价，细胞毒性评价均

3、为l级，细胞毒性实验合格。通过倒置显微镜和扫描电子显微镜观察到成纤维细胞均能贴附于RmCII膜。通过MTT法，成纤维细胞在RmCII膜上均能实现增殖且增殖情况没有显著性差异(P>o．05)。此外，当戊二醛浓度在0．05％以上时，RHLCII膜的抗张强度可以达到11MPa。0．05％的戊二醛浓度为采用自然干燥法制备RHLCn膜的最优浓度。2．改进交联工艺，用无菌风吹干法制备RHLCII膜。采用终浓度为0．05％和O．1％的戊二醛对RHLCII进行交联。RHLCII膜细胞毒性评价均为0-1级，细胞毒性实验合格。成纤维细胞在RHLCⅡ膜上均能实现贴附和增殖，并且增殖情况没有显著性性差异(

4、P>o．05)。通过扫描电子显微镜观察到RmCⅡ膜上的成纤维细胞均能连接成片，形成多层细胞。此外，当戊二醛浓度为0．05％和O．1％时，RHLCII膜抗张强度均能达到IIMPa。无菌风吹干法制备砌{LCII膜，选择O．05％的戊二醛浓度。3．采用终浓度为0．01％，0．05％，O．1％，0．15％，O．2％的戊二醛交联RHLCII，通过冷冻干燥法制备RHLCII海绵。当戊二醛浓度在0．05％以上时，能制备出RHLCII海绵，细胞毒性评价均为o-l级，细胞毒性实验合格。倒置显微镜、荧光显微镜、扫描电子显微镜观察及冰冻切片HE染色结果表明成纤维细胞均能很好地贴附于RHLCII海绵上并且

5、生长情况良好。通过细胞计数法，当戊二醛浓度在0．1％以上时，成纤维细胞在各RHLCII海绵上的增殖情况没有显著性差异(P>o．05)，并且优于戊二醛浓度为O．05％的RHLCII海绵(P

6、oreattention，Asakindofnaturalbiomaterial，collagenhaslowantigenicity,biodegradability,goodbiocompatibilityandCanpromotecellmigrationandproliferation．Collagenhasbeenwidelyusedintissueengineeringfield．RHICII(recombinanthuman-likecollagenII、舔akindofrecombinantcollagenWaSproducedbyhighcell-densityc

7、ultivationofrecombinantEscherichiacolicontainingapartialeDNAthatWaSreversedbymRNAfi'omhumancollagen．Comparingwiththecollagenfromanimaltissues，RHLCIICanbefreeofvirusandeasilyindustrializedbylargescale．Thepreparationoftissueengineeringsca