牛胶原蛋白三维载体支架的制备及其与人角膜基质细胞的生物相容性研究

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1、尚斯义乐變呼ｆＯＣＥＡＮＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹＯＦＣＨＩＮＡ硕壬学位论文ＭＡＳＴＥ民ＤＩＳＳＥＲＴＡＴＩＯＮ牛胶原蛋白王维载体支架的制备及其与人角论文题目；膜基质细胞的生物相容性硏究ＰｒｅａｒａｔｉｏｎｏｆＣｏｍｅａｌＳｃａｆｆｏｌｄｂｙＢｏｖｉｎｅＣｏｌｌａｅｎｐｇａｎｄＩｔｓＢｉｏｃｏｍａｄｂＵｉｔｙｖａｌｕａｔｉｏｎｗｉ化ＨｕｍａｎｐＥＣｏｒｎｅａｌＳｔｒｏｍａｌＣｅｌｌｓ英文题目－作者；李亚男指导教师；樊廷俊学位类别：全日制学求学位细胞生物学

2、专业名赖；胞工程研究方向：．绵．…．．．．．一二．谨於此论文献给我尊敬的导师从及我的家人和所有关心帮助我的人牛胶原蛋白Ｈ维载体支架的制备及其与人角膜基质细胞的生物相容性研究学位论文答辩。期：巧导教师签字為答辩委员会成员签字：齡俗／独创舌明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除，论文中。据我所知了文中特别加Ｗ标注和致谢的地方外不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含末获得（注＝如没有其他需要特别声明的，本栏可空）或其他教育机构的学位或证

3、书使用过的材料一。与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名签字円期：＞成＾〇＾月＾円学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，并同意Ｗ下事项：１、学校有权保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。２、学校可Ｗ将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可Ｗ采＂用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同时授权清华大学中＂国学术期刊（光盘版）电子杂志社用于出版和编入ＣＮＫＩ《中国

4、知识资源总库》，授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》。（保密的学位论文在解密后适用本授权书）学位论文作者签名导师签字：伽签字円期年巧月签字Ｈ期巧年底月从Ｈ；ＩＩＩ牛胶原蛋白Ｈ维載体支架的制备及貧与人角巧基质细胞的生巧相容性研究牛胶原蛋白载体支架的制备及其与人角膜基质细胞的生物相容性研究摘要一角膜是位于眼球最前端的层透明薄膜姐织，在保护眼球、提供屈光力和保障视功能方面发挥了重要功能。热烫伤、机械损伤Ｗ及病菌感染等所、化学烧伤造成的角膜病，是仅次于白内障的第二大致盲眼病。虽

5、巧角膜移植是治疗角膜病一盲的唯有效手段，但由于捐献角膜严重匿乏，导致绝大多数患者无法通过角膜移植恢复视力，而体外构建的组织王程角膜作为理想的捐献角膜替代品，是目前解决供体角膜匿乏的根本途径。在组织工程角膜的体外构建研究中，载体支架起关键作用，能够为种子细胞提供结构支撑并起到模板作用Ｗ引导组织再生和控制組织结构。用于构建组织王程角膜的支架材料主要有异种角膜基质等天然材料、人王合成高分子材料Ｗ及胶原和壳聚糖等生物大分子复合材料。与其它支架材料相比，胶原在生物相容性、免疫原性、可降解性等方面均具有明显的优势。鉴于重组人胶原蛋

6、白价格昂贵等问题一，在定程度上限制了利用胶原蛋白制备组织工程角膜载体支架的研发和应用。而牛胶原蛋白来源丰富，提纯方法简便且得率高，在胶原蛋白王维载体支架的制备和推广应用方面日益表现出良好的前景。但到目前为止，仍未见到有关提取和纯化牛胶原蛋白Ｗ及利用牛胶原蛋白制备组织工程角膜载体支架及其生物相容性的研究报道。本文，１３０ｍ／ｍＬ），（＾牛肌瞄为材料提取牛胶原蛋白然后利用牛胶原蛋白（ｇ／采用冻干法制成支架巧干片，再化学交联剂ＥＤＣＮＨＳ进行交联，然后对其理ＥＤＣ＝４ＮＨＳ１２５１化性质和组织结构进行检测：．：。结果显示交联剂比

7、例时制备的４－＝－１．５％８９．６３００８００支架表面平整，厚度均匀，透光％（ＷＬｎｍ；光学透明度高率为ｒｎｎ）量约８３．６６％±１．７５％；机械性能较好：载体支架结构较致密，且形成；含水多孔的片层结构，该。上结果显示方法制备的牛胶原蛋白载体支架在光学透明度，。、含水量和组织结构方面均与天然角膜相似保证了后续探索实验的开展本文对来源于本实验室自主建立的人角膜基质细胞系的第６８代人角膜基质细胞（ＨＣＳＣ）进行体外培养和鉴定。结果显示体外培养的ＨＣＳＣ呈现典型的纤维样，增殖旺盛，群体倍增时间为巧．０３ｈ；细胞染色体组型正常；

8、免疫细胞化学法检测ＨＣＳＣ标志蛋白）和功能蛋白（间隙连接蛋白４３、整联蛋（波形蛋白白、芭薛脱氨酶３Ａ